ТЕМА: «Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых гемофилами».

I План занятия

1. Закрепить знания по изучению таксономии, морфологии, методов лабораторной диагностики гемофилов.

2. Изучить правила забора, хранение и транспортировки биологического материала приинфекциях, вызываемых гемофилами.

4. Овладеть методикой и техникой бактериоскопического и бактериологического методов диагностики гемофилов.

5. Изучить методики и провести постановку тестов идентификации гемофилов.

6.Изучить экспресс – методы обнаружения капсульного антигена (латекс-агглютинация, коагглютинация со стафилококковым протеином А, реакция встречного иммуноэлектрофореза).

II Самостоятельная работа

Задание 1

Познакомьтесь с нормативной документацией, регламентирующей микробиологическую диагностику гемофилов:

1. Микробиологические методы исследования биологического материала. Инструкция от 13.03.2010г. Р № 075-0210.

2. Временные методические рекомендации по забору и транспортировке биологического материала на гемофильную инфекцию № 02 -19/ 1638 от 21.06.2007г., ГУ «ГОЦГЭ и ОЗ», Шерендо Я.М.

3. Приказ № 68/ 14-с от 13.02.2007г «О формировании системы эпидемиологического надзора за гемофильной инфекцией».

Задание 2

Изучите правила забора, хранения и транспортировки исследуемого материала – кровь, спинномозговая жидкость, мокрота - по рекомендациям по забору материала на гемофильную инфекцию ГУ «ГОЦГЭ и ОЗ», Гродно, 2007(см. Приложение № 1).

Задание 3

Изучите по таблицам морфологические свойства гемофилов, зарисуйте в дневник и подпишите (см. Приложение № 2).

 

Задание 4

Приготовьте питательные среды, используемые при выделении гемофилов:

Кровяной агар

Способ приготовления: к 100 мл расплавленного и охлажденного до 45°-50⁰С С питательного агара, соблюдая правила асептики, добавте 5% (5 мл крови на 100 мл питательной среды) сердечно - мозгового экстракта или дефибринированной крови человека, разлейте в стерильные чашки Петри, предварительно подогретые в термостате.

Шоколадный агар (с гретой кровью)

Принцип. Прогревание крови способствует освобождению из

эритроцитов факторов роста X (гемин) и V

(никотинамидадениндинуклеотид), необходимых для культивирования

гемофилов.

Способ приготовления: к 100 мл расплавленного и охлажденного до

80°С питательного агара добавте 10 мл дефибринированной

крови человека, тщательно перемешайте, после чего помещайте в

водяную баню и, постоянно встряхивая, держите при температуре 70°С-

80°С до тех пор, пока цвет агара не станет шоколадным (25-30 мин.),

разлейте в стерильные чашки Петри.

Шоколадный бульон

Способ приготовления: к 180 мл питательного бульона добавте 18 мл

крови (9 мл эритоцитной массы и 9 мл сыворотки крупного рогатого скота)

и 9 мл дрожжевого экстракта, разлейте в стерильные пробирки.

Задание 5

Изучите питательные среды, используемые для культивирования гемофилов (демонстрации сред), зарисуйте в дневник, опишите характер роста гемофилов на данных средах (см. Приложение № 3).

 

 

 

1 2 3

Характер роста на средах:

1.

 

2.

 

3.

Задание 6

Проведите 1-й этап бактериологического исследования материала (мокроты) с целью выделения гемофилов.

Алгоритм проведения I-ого этапа бактериологического

исследования при выделении гемофилов:

1. Сделайте два мазка из мокроты. Окрасьте один мазок по методу Грама-Синева, второй - по методу Бурри- Гинса. Изучите их под микроскопом, зарисуйте в дневник и сделайте предварительное заключение.

 

Окраска по методу Окраска по методу

Грама-Синева Бурри-Гинса

Заключение:

Примечание: при окраске по Граму- Синева бактерии Haemophilus мелкие, бледно окрашенные грам (–) палочки, по Бурри – Гинсу бактерии окрашиваются в красный цвет, капсулы остаются неокрашенными, резко выделяющиеся на черном фоне.

2. Проведите посев исследуемого материала (мокроты) на кровяной агар шпателем. Посевы инкубируют 37⁰С 24 часа.

Задание 7

Изучите методики и проведите постановку тестов идентификации гемофилов.

Биохимическая идентификация микроорганизмов рода Haemophilus

(см. Приложение № 4).

Алгоритм