Лабораторная диагностика гепатита С

Предварительный клинический диагноз ВГС основывается на исключении вирусного гепатита А и вирусного гепатита В. Окончательный диагноз ставится на основании лабораторных исследований.

Специфические серологические методы диагностики гепатита С в настоящее время разрабатываются.

В отдельных случаях выявление антител к антигенам HCV может дополняться определением РНК вируса в сыворотке крови больных с помощью постановки ПЦР. Так можно обнаружить HCV вскоре после инфицирования. В Тюмени лабораторная диагностика ВГС этими методами проводится с 1989.

Диагностика заболеваний проводится в зависимости от клинических проявлений болезни. При острой инфекции с помощью ИФА в сыворотке выявляют циркулирующие антигены и иммуноглобулины класса М к ВГС. С помощью иммуноблоттинга устанавливается антигенная структура ВГС, циркуляции его в крови.

При хронической форме инфекции вирус гепатита С в крови находится в меньшей концентрации и диагноз ставится по выявлению в крови IgG к ВГС. Вирус при этой форме находится в клетках, поэтому РНК можно определить с помощью ПЦР.

ПЦР в настоящее время является единственным высокочувствительным методом диагностики острого ВГС и выявления больных с хроническим гепатитом.

ИФА, иммуноблоттинг на ag вируса

Кровь, сыворотка

ПЦР на наличие РНК HCV

ИФА на Ig М,G

Маркеры гепатитов с парентеральным механизмом передачи инфекции

Возбудитель	Маркеры	Диагностическое значение
Вирус НВ	HBsAg	Обнаруживаются в инкубационном периоде и начале желтушного периода у большинства больных (60–70%) острым гепатитом. Положительный в большинстве случаев острого или хронического гепатита.
	HBcAg	В сыворотке обычно не определяется
HBeAg	Обнаруживаются в инкубационном периоде и начале желтушного периода у большинства больных (60–70%) острым гепатитом.
анти-HBc (IgM, IgG)	Положительные в случае острой и хронической инфекции и у носителей – маркеров HBV-инфекции; не протективные; анти- HBc IgM отражают репликацию вируса
анти-HBe	Транзиторно позитивные при реконвалесценции, при некоторых формах хронической инфекции и у носителей, не протективные, отражают низкую инфекционность
анти-HBs	Становятся позитивными в позднюю фазу реконвалесценции в большинстве острых случаев, протективные.
preS1Ag	Маркер инфекционности и высокого риска вертикальной передачи НВV
анти-preS2	Маркер выздоровления после HBV-инфекции высокой эффективности
Вирус НС	анти-HCV	Становятся позитивными через 5-6 недель после появления клинических симптомов; серопозитивные лица должны рассматриваться как зараженные (как инфицированные)
Вирус НD	ДельтаG анти-HDV (IgM илиIgG)	Указывают на инфицированность; непротективные

ЕСЛИ В КРОВИ: HBsAg – носительство HBsAg + IgM – острая стадия болезни HBsAg + IgG – хроническая стадия болезни

АНТИМИКРОБНЫЕ ПРЕПАРАТЫ

СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ

1. В инфекционную больницу обратился мужчина с клиническими признаками гепатита. Больной являл­ся наркоманом. Какой исследуемый материал можно взять для проведения лабораторных исследований, чтобы подтвердить диагноз гепатита В? Какие методы лабораторного исследова­ния можно использовать?

Пример решения задачи

В инфекционную больницу поступил мужчина 20 лет с температурой 38 °С, жалобами на боли в правом под­реберье, иктеричностью склер. Больной является наркоманом. Возникло подозрение на гепатит В. Для подтверждения диагно­за был проведен ИФА в целях обнаружения HBsAg и антител к HBcAg. Учесть результат реакции, оформить протокол, сде­лать вывод.

Для учета результатов выделяются исследования планшеты с ИФА для серологической (обнаружение AT) и экспрессной (обнаружение АГ) диагностики гепатита В.

Вопросы. Подтвержда­ется ли диагноз гепатита В у обследуемого? Почему?

Решение. Студент учитывает данные ему результаты ис­следований, заполняет протокол и делает вывод: У обследуе­мого подтвержден диагноз гепатита В, так как у него обнару­жены антитела к HBcAg вируса гепатита В и выявлен HBsAg.

Лечебные препараты:

Антивирусные препараты первого поколения - аденинарбинозид, видарабин, ацикловир, рибовир, квинакрин.

• АЦИКЛОВИР - аномальный нуклеотид, который встраивается в геном вируса и репродукция прекращается.

• АДЕНИНАРАБИНОЗИД - антивирусный эффект обусловлен включением нуклеотида во вновь синтезируемую ДНК вируса. Данные препараты не нашли широкого применения.

• ИНТЕРФЕРОНЫ и его индукторы обладают иммуномодулирующим и противовирусным эффектом. Широко применяется реаферон и велферон -высококачественный препарат человеческого α - интерферона.

 

ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ:

I. ВАКЦИНЫ против ВГВ:

1. Отечественная вакцина гепатита В рекомбинантная дрожжевая жидкая фирмы

"Комбиотех ЛТД".

2. Бельгийская вакцина—Engerix - В, фирмы "Смит Кляйн Бичем".

3. Американская вакцина—Recombivax НВ, производства фирмы "Мерк Шарп

и Доум".

4. Кубинская —ДНК рекомбинантная вакцина против гепатита В (Rec-HBsAg).

 

Наибольшее распространение получила вакцина "Энджерикс - В" (Engerix - В). Одна доза вакцины содержит 20 мкг HBs антигена, продуцируемого культурой дрожжевых клеток, полученных методом генной инженерии и имеющих ген, кодирующий формирование HBsAg ВГВ. Этот антиген очищается и адсорбируется на алюминии гидрохлориде. Вакцина обеспечивает высокий уровень антител, а также обладает высокой эффективностью.

Вакцинация проводится трехкратно с интервалом в 1 мес. Ревакцинацию проводят через 3-5 лет, т. е. вакцина создает надежный иммунитет в течение 5 лет. В первую очередь вакцинации подлежат лица группы риска.

II. Иммуноглобулин человека против гепатита В применяется для пассивной профилактики болезни.

Гепатит G

В 1966 году врач-хирург перенес вирусный гепатит, возбудитель которого ещё не был отнесен ни к одному известному вирусу - возбудителю гепатитов. По инициалам врача он был обозначен GB-антигеном. Дальнейшие исследования показали неоднородность этого вируса, похожие, но не идентичные вирусы выделяли из крови сывороточным гепатитом, а выделенный возбудитель получил название HGV или GBV-С. Методом ПЦР установлено, что РНК вируса часто обнаруживается у лиц, которым производили переливания крови и парентеральные вмешательства, у больных гемофилией, хроническими гепатитами В, С и D, в образцах коммерческой плазмы, предназначенной для приготовления препаратов крови.

Распространен везде. Частота обнаружения возбудителя в России составляет от 2%-до 8%.

Гепатит G передается посредством крови, точно так же, как и гепатит С. В рядах наркоманов эта болезнь имеет широкое распространение. Заражение происходит также при парентеральных вмешательствах, гемотрансфузиях. Заразиться можно при половом контакте и от зараженной матери ребенку вертикальным путем.

По клиническим проявлениям гепатит G очень схож с гепатитом С. Но для заболевания гепатита G совсем не характерно то, что присуще ГС, а именно, прогрессирующий инфекционный процесс с постепенным развитием ХГ, гепатокарциномы и цирроза печени. Обычно, инфекционный острый процесс проходит бессимптомно. Главным маркером, использующимся для диагностики гепатита G считается РНК HGV, которая выявляется методом ПЦР. В поздние сроки обнаруживаются Анти-HGV, тогда, когда РНК HGV исчезает из крови, и работают маркером выздоровления. Следствием острого ГG являются: формирование хронического гепатита с долгим обнаружением РНК HGV, персистирующей несколько лет с дальнейшим исчезновением впоследствии и синтезом анти-HGV; возможно, выздоровление с элиминацией РНК HGV и возникновением анти-HGV; также, может быть формирование долгого носительства HGV. Максимальный срок обнаружения РНК HGV доходит до 9-12 лет. Надо сказать, частота, с которой выявляют анти-HGV довольно велика, что подтверждает крайне редкое развитие хронизации при болезни гепатит G, по сравнению с гепатитом С.

Клиническое протекание хронической болезни гепатит G, в основном, носит легкий характер с низким коэффициентом повышения активности АлАТ на протяжении долгого времени. При хорошей ПЦР на вирус часто замечается повышение активности гамма-глутамилтранспептидазы и щелочной фосфатазы, что может говорить о том, что желчевыводящие протоки поражены. Морфологическая характеристика хронического Гепатита G схожа с изменениями, которые описаны для гепатита С. Пока, внепеченочных проявлений гепатита G зарегистрировано не было. На сегодняшний день нет точных сведений, сможет ли персистенция ВГG "запускать" выборочно аутоиммунные механизмы. HCV/HGV-инфекцию можно наблюдать очень часто, для нее характерны цирозогенность и прогрессирование инфекционного процесса. Углубленное обследование больных с наличием РНК HGV и ее отсутствием не показало каких-либо различий в биохимических, морфологических и вирусологических показателях. Это еще раз подтверждает: HGV не оказывает никакого влияния на протекание HCV-инфекции.

 

Гепатит F

Вирус гепатита f только начинает изучаться, поэтому сведений о нем в достаточном объеме пока не накоплено, а имеющиеся данные достаточно противоречивы. Всемирная организация здравоохранения еще в 1973 году приняла решение раздельно регистрировать вирусные гепатиты А и В. Так как ряд вирусов не подходил ни под одну, ни под другую группу, было решено гепатиты, вызываемые этими вирусами называть «ни А, ни В». Позже эти заболевания стали называться «ВГС и ВГЕ». На сегодняшний день хорошо изучены пять видов гепатита: А, В, С, D и E. Однако в результате клинических исследований был выявлен факт, что кровь некоторых людей, явно перенесших гепатит после переливания крови, остается серонегативной по отношению ко всем известным маркерам вирусного гепатита, что дает возможность предположить о существовании других его видов. В разных странах количество таких людей достигает 15-20%. Кроме этого некоторые лица, перенесшие лабораторно подтвержденные гепатиты хорошо изученных групп и выработавшие к ним иммунитет, вновь заболевали желтухой, которую невозможно было связать с группами A, B, C, D, E и G.

Таким образом, на сегодняшний день к группе вирусов, вызывающих гепатит F, относят два различных вируса. Один из них был выделен из донорской крови и обладал следующими свойствами:

· не растворялся в жирах;

• не вызывал характерных для гепатита С изменений в клетках печени;
• у шимпанзе, привитых от гепатита С и зараженных этим видом вируса, развивалось состояние сходное с гепатитом;

· заражение обезьян, не имеющих иммунитет к гепатиту С, не вызывало появление к нему антител.

Второй вид вируса был выделен из фекалий больного гепатитом, возникшим в результате гемотрансфузии. Свойства вируса были такими:

· он имел способность размножаться в монослойных культурах клеток;

· вызывал гепатит у макак-резусов;

· по своим свойствам напоминал аденовирус.

Симптомы: клиника этого заболевания сходна с клиникой других вирусных посттрансфузионных гепатитов. Органом мишенью для вируса f является печень. В результате разрушения ее клеток, нарушается функция, что приводит к поражению всего организма. Можно выделить следующие фазы течения болезни:

· инкубационная;

• преджелтушная;
• желтушная с периодами: нарастания желтухи, ее разгара и угасания;
• реконвалесценции;

· остаточных явлений.

Длительность каждой фазы зависит от дозы возбудителя, способа его проникновения в кровь, индивидуальных особенностей и генетической предрасположенности человека, наличием или отсутствием сопутствующих заболеваний, адекватностью и своевременностью лечения и т.д.

Симптомы гепатита F включают желтуху, лихорадку, асцит, увеличение печени и селезенки, изменение показателей крови (повышение уровня билирубина и печеночных ферментов), изменения в моче и кале, а также признаки общей интоксикации.

Лечение: комплекс лечебных мероприятий должен быть направлен на борьбу с интоксикацией, на восстановление клеток печени и улучшение ее работы, на поддержание других органов и систем. Используется щадящая диета, прием витаминов, гепатопротекторов, симптоматическая терапия. Эффективное этиологическое лечение гепатита F, т.е. непосредственно направленное на борьбу с этим вирусом, пока не разработано. Применяются препараты из группы интерферонов.

Вирус TTV (transfusion transmitted virus, Torque teno virus) был открыт в 1997 в сыворотке крови японского пациента с инициалами Т.Т. с посттрансфузионным гепатитом неясной этиологии.

TTV - это небольшой вирус без оболочки, содержащий циклическую ДНК. Это простоустроенный вирус, имеющий икосаэдрический тип симметрии. Размер вириона 30-50 нм. Содержит кольцевую однонитевую минус ДНК. Капсид состоит из белка VP1. Различают более 10 генотипов вирусов. Репродукция вирусов происходит, очевидно, в ядрах гомопоэтических клеток. Вирионы собираются в цитоплазме и выходят при лизисе клеток. Предположительным резервуаром клеток является печень. По геномной организации TTV схож с патогеном животных CAV (chicken anemia virus) из семейства Circoviridae. Таким образом, TTV является первым цирковирус-подобным вирусом, обнаруженным у человека. На сегодняшний день вирус отнесен к новому роду Anellovirus. Родственные TTV вирусы были найдены у кур, свиней, коров, овец, собак, тупайи и приматов, включая человекообразных обезьян.

Устойчив к факторам внешней среды. Предполагают, что TTV можно рассматривать как представителя нормальной микрофлоры человека. TTV-вирусемия распространена среди здоровых людей. Возможно участие вируса в поражениях печени (гепатит). В результате высокой изменчивости вируса, одновременного наличия в организме различных вариантов TTV происходит «ускользание» вируса от защитных факторов организма человека.

TTV вызывает долгую, практически пожизненную виремию у большинства людей независимо от возраста, состояния здоровья и других параметров. Инфекция носит персистирующий характер, реплицирующийся вирус присутствует в самых разных участках организма, включая костный мозг, лимфоидную ткань, легкие и печень.

Фактически от 70% до 90% всей мировой популяции человека являются носителями вируса TTV, и пока что вирус не был с уверенностью ассоциирован с каким-либо заболеванием, похоже обладая замечательной способностью приспосабливаться к своему хозяину. Интересно, что повышенная вирусная нагрузка отмечена у пациентов с тяжелой идиопатической воспалительной миопатией, раком или волчанкой. Активная репликация вируса также была обнаружена у детей с острыми респираторными заболеваниями.

Пациенты с гемофилией имеют высокий риск инфицирования GBV-C/HGV и TTV.

Основной путь передачи вируса - парентеральный, но не отрицается возможность фекально-орального распространения вируса и возможность передачи вируса половым путем. В группе риска находятся реципиенты компонентов крови, наркоманы, сексуальные партнеры, существует риск передачи вируса через бытовые контакты.