Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Кинетика фер-тативных процессов ур-ние михаэлис-Мэнтен
Общие принципы кинетики хим р-ций применимы и к ф-тативным р-циям. Известно, что любая хим р-ция хар-ризуется константой термодинамич равновесия. Она выражает состояние химического равновесия, достигаемого системой, и обозначается Кр. Так, для р-ции: константа равновесия равна произведению конц-ций образующихся в-в, деленному на произведение конц-ции исходных в-в. Значение константы равновесия обычно нах из соотнош констант скоростей прямой (k+1) и обратной (k– 1) р-ций, т.е. Кp = k+1/k–1. В состоянии равновесия скорость прямой р-ции: v+1 = k + 1[ А ] • [ B ] равна скорости обратной р-ции: v–1 = k – 1 [ С ] • [ D ], т. е. v+1 = v–1 соотв-енно k+1[А]•[B] = k–1[С]•[D], или Т.об., константа равновесия = отнош констант скоростей прямой и обратной р-ций. Величину, обратную константе равновесия, принято называть субстратной константой, или, в случае ф-тативной р-ции, константой диссоциации ф-т–субстратного комплекса, и обозначать символом KS. Так, в р-ции т.е. KSравна отношению произведения конц-ции ф-та и субстрата к конц-ции ф-т-субстратного комплекса или отнош констант скоростей обратной и прямой р-ций. Константа KS зависит от хим природы субстрата и ф-та и определяет степень их сродства. Чем ниже значение KS, тем выше сродство ф-та к субстрату. При низкой конц-ции субстрата зависимость скор р-ции от конц-ции субстрата явл почти линейной и подчиняется кинетике первого порядка. Это означает, что скорость р-ции S —> Р прямо пропорц конц-ции субстрата S и в любой момент времени t определяется след кинетическим ур-нием: где [S] – молярная конц-ция субс-та S; –d[S]/dt – скор убыли субстрата; k' – константа скорости р-ции, к-рая имеет размерность, обратную единице времени (мин–1 или с–1). При высокой конц-ции субстрата скор р-ции максимальна, стан-тся пост и не зависящей от конц-ции субстрата [ S ]. В этом случае р-ция подчиняется кинетике нулевого порядка v = k" (при полном насыщении ф-та субстратом) и целиком определ-ся конц-цией ф-та. Различают р-ции 2-ого порядка, скорость к-рых пропорциональна произведению конц-ций двух реагирующих в-в. В определенных условиях при нарушении пропорциональности говорят иногда о р-циях смешанного порядка. Изучая явление насыщения, Л. Михаэлис и М. Ментен разработали общую теорию ф-тативной кинетики. Они исходили из предположения, что ф-тативный процесс протекает в виде след хим р-ции:
т.е. ф-т Е вступает во вз-действие с субстратом S с обр-нием промежуточного комплекса ES, к-рый далее распадается на свободный ф-т и продукт р-ции Р. Матем обработка на основе закона действующих масс дала возм-сть вывести ур-ние, названное в честь авторов ур-ем Михаэлиса–Ментен, выражающ кол-ное соотнош м/у конц-цией субстрата и скор ф-тативной р-ции: где v – скор р-ции при данной конц-ции субстрата [S]; KS– константа диссоциации ф-т-субстратного комплекса, моль/л; Vmax– максим скор р-ции при полном насыщении ф-та субстратом. Из ур-ния Михаэлиса–Ментен следует, что при высокой конц-ции субстрата и низком значении KS скор р-ции явл максим, т.е. v = Vmax. При низкой конц-ции субстрата, напротив, скорость р-ции оказывается пропорциональной конц-ции субстрата в каждый данный момент (р-ция первого порядка). Следует указать, что ур-ние Михаэлиса–Ментен в его классическом виде не учитывает влияние на скорость ф-тативного проц продуктов р-ции, напр в р-ции и носит несколько ограниченный хар-р. Поэтому были предприняты попытки усовершенствовать его. Так, было предложено ур-ние Бриггса-Холдейна: где Кm представляет собой константу Михаэлиса, являющуюся экспериментально определяемой величиной. Она может быть представлена следующим ур-нием: Кривая ур-ния Михаэли-са-Ментен: гиперболическая зависимость начальных скоростей катализируемой ф-том р-ции от конц-ции субстрата. В числителе представлены константы скоростей распада комплекса ES в двух направлениях (в сторону исходных Е и S и в сторону конечных продуктов р-ции Е и Р). Отношение k–1/ k+1представляет собой константу диссоциации ф-тсубстратного комплекса KS, тогда: Отсюда вытекает важное следствие: константа Михаэлиса всегда больше константы диссоциации ф-т-субстратного комплекса KSна величину k+2/k+1. Для определения численного значения Кm обычно находят ту конц-цию субстрата, при к-рой скорость ф-тативной р-ции v составляет половину от максимальной Vmax, т.е. если v = 1/2 Vmaх. Подставляя значение v в ур-ние Бриггса–Холдейна, получаем:
разделив обе части ур-ния на Vmах, получим Т.об., константа Михаэлиса численно равна конц-ции субстрата (моль/л), при к-рой скорость данной ф-тативной р-ции составляет половину от максимальной. Определение величины Кm имеет важное значение при выяснении механизма действия эффекторов на активность ф-тов и т.д. Константу Михаэлиса можно вычислить по графику (рис. 4.13). Отрезок на абсциссе, соотв-ующий скорости, равной половине максимальной, будет представлять собой Кm. Пользоваться графиком, построенным в прямых координатах зависимости начальной скорости р-ции v0 от начальной конц-ции субстрата [S0], неудобно, поскольку максимальная скорость Vmaxявл в данном случае асимптотической величиной и определяется недостаточно точно. График Лайнуивера-Бэрка. Для более удобного графического представления экспериментальных данных Г. Лайнуивер и Д. Бэрк преобразовали ур-ние Бриггса–Хол-дейна по методу двойных обратных величин исходя из того принципа, что если существует равенство м/у двумя какими-либо величинами, то и обратные величины также будут равны. В частности, если или то после преобр-ния получаем ур-ние: к-рое получило название ур-ния Лайнуивера–Бэрка. Это ур-ние прямой линии: у = ах + b. Если теперь в соотв-ии с этим ур-нием построить график в координатах 1/v (y) от l/[S] (x), то получим прямую линию (рис. 4.14), тангенс угла наклона к-рый будет равен величине Km/Vmax; отрезок, отсекаемый прямой от оси ординат, представляет собой l/Vmax(обратная величина максимальной скорости). Если продолжить прямую линию за ось ординат, тогда на абсциссе отсекается отрезок, соотв-ующий обратной величине константы Михаэлиса – 1/Кm (см. рис. 4.14). Т.об., величину Кm можно вычислить из данных наклона прямой и длины отрезка, отсекаемого от оси ординат, или из длины отрезка, отсекаемого от оси абсцисс в области отрицательных значений. Следует подчеркнуть, что значения Vmax, как и величину Кm, более точно, чем по графику, построенному в прямых координатах, можно определить по графику, построенному по методу двойных обратных величин. Поэтому данный метод нашел широкое применение в современной энзимологии. Предложены также аналогичные графические способы определения Кm и Vmaxв координатах зависимости v от v/[S] и [S]/v от [S]. Следует отметить нек-рые ограничения применения ур-ния Ми-хаэлиса–Ментен, обусловленные множественными формами ф-тов и аллостерической природой ф-та. В этом случае график зависимости начальной скорости р-ции от конц-ции субстрата (кинетическая кривая) имеет не гиперболическую форму, а сигмоидный хар-р наподобие кривой насыщения гемоглобина кислородом. Это означает, что связывание одной мол-лы субстрата в одном каталитическом центре повышает связывание субстрата с другим центром, т.е. имеет место кооперативное вз-действие, как и в случае присоединения кислорода к 4 субъединицам гемоглобина. Для оценки конц-ции субстрата, при к-рой скорость р-ции составляет половину максимальной, в условиях сигмоидного хар-ра кинетической кривой обычно применяют преобр-нное ур-ние Хилла:
|
||||||
Последнее изменение этой страницы: 2017-01-24; просмотров: 158; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 3.16.81.94 (0.008 с.) |