Качественные реакции на моносахариды

 

По химическому строению моносахариды представляют собой альдегидо- или кетомногоатомные спирты. По числу атомов углерода моносахариды подразделяют на триозы, тетрозы, пентозы, гексозы, гептозы и т.д. Наиболее распространёнными в природе являются пентозы и гексозы.

 

1. Реакция Молиша с α-нафтолом

При взаимодействии их с концентрированной серной кислотой образуются фурфурол или оксиметилфурфурол:

В присутствии α-нафтола как фурфурол, так и оксиметилфурфурол дают лейкосоединение I триарилметанового характера (бесцветное), а это лейкосоединение окисляется серной кислотой в окрашенное хиноидное соединение II (красно-фиолетового цвета):

В пробирку помещают 1 мл 1% раствора глюкозы, 2 капли 10% спиртового α-нафтола и по стенке пробирки осторожно приливают 2 мл концентрированной H2SO4. Серная кислота опускается на дно пробирки и на границе двух жидкостей образуется кольцо красно-фиолетового цвета.

 

2. Реакция Селиванова на кетогексозы

При нагревании с соляной кислотой кетогексоза превращается в оксиметилфурфурол, который с резорцином образует соединение красного цвета. Альдогексозы также дают эту реакцию, но реакция у них протекает значительно медленнее, что обусловливает специфичность реакции

Селиванова на кетогексозы.

В две пробирки наливают по 2 мл реактива Селиванова (раствор резорцина в соляной кислоте), в одну из них прибавляют 2 капли 1 % раствора фруктозы, в другую – 2 капли 1% глюкозы, нагревают до кипения. В пробирке с фруктозой появляется красное окрашивание.

 

3. Реакции на восстанавливающие свойства моносахаридов

Все моносахариды, имеющие свободную карбонильную группу (альдегидную или кетонную), обладают способностью в щелочной среде при нагревании восстанавливать окисные формы металлов в закисные или даже до свободного состояния. Моносахариды при этом образуют соответствующие кислоты. Это свойство моносахаридов используется для некоторых

качественных и количественных реакций.

 

1) Реакция Фелинга — восстановление гидрата окиси меди. Реакция заключается в восстановлении моносахаридами гидрата окиси меди в закись меди. При проведении реакции используется реактив Фелинга, представляющий собой смесь медного купороса (CuSO4) с сегнетовой солью (K, Na - виннокислый) в щелочной среде. При смешивании медного купороса

со щёлочью происходит реакция: CuSO4 + 2NaOH → Cu(ОH)2 + Na2SO4.

В присутствии сегнетовой соли в щелочной среде гидрат окиси меди не выпадает в осадок, так как образуется растворимое комплексное соединение окисной меди с сегнетовой солью:

При взаимодействии моносахаридов с фелинговой жидкостью происходит их окисление и образуется закись меди (Cu2O) красного цвета:

 

К 1-2 мл 1% раствора глюкозы приливают равный объём реактива Фелинга

и смесь нагревают на кипящей водяной бане. Выпадает красный осадок Cu2O.

 

2) Реакция Ниландера – восстановление гидрата окиси висмута. Заключается в восстановлении моносахаридами гидрата окиси висмута в металлический висмут. Реактив Ниландера содержит основной азотнокислый висмут, сегнетову соль и едкий натр. Сегнетова соль добавляется для того, чтобы гидрат окиси висмута, образованный при взаимодействии азотнокислого

висмута и щёлочи, оставался в растворе.

 

В пробирку наливают 1-2 мл 1% раствора глюкозы и 0,5-1 мл реактива Ниландера, прогревают на кипящей водяной бане до появления тёмно-бурого окрашивания, что свидетельствует об образовании металлического висмута.

 

3) Реакция Мульдера на восстановление индиго. Основана на способности моносахаридов восстанавливать (обесцвечивать) индиго синее (в этой реакции принимает участие гидратная форма моносахарида):

В пробирку наливают 2 мл 1% раствора глюкозы, прибавляют 4-5 капель соды и 2 капли раствора индиго синего и нагревают – происходит обесцвечивание краски. Если жидкость охладить и взболтать, то вновь появляется синее окрашивание, так как индиго бесцветное окисляется за счёт

кислорода воздуха.

 

Билет №4

1)Аминокисло́ты — органические соединения, в молекуле которых одновременно содержатся карбоксильные и аминные группы.

Свойства аминокислот. Физические свойства. Аминокислоты – твердые кристаллические вещества с высокой температурой плавления. Хорошо растворимы в воде, водные растворы электропроводны. Эти свойства объясняются тем, что молекулы аминокислот существуют в виде внутренних солей, которые образуются за счет переноса протона от карбоксила к аминогруппе:

Аминокислоты с одной карбоксильной группой и одной аминогруппой имеют нейтральную реакцию.

Химические свойства. Аминокислоты проявляют свойства оснований за счет аминогруппы и свойства кислот за счет карбоксильной группы, т.е. являются амфотерными соединениями. Кроме того, возможно взаимодействие амино- и карбоксильной групп как внутри одной молекулы (внутримолекулярная реакция), так и принадлежащих разным молекулам (межмолекулярная реакция). Межмолекулярное взаимодействие α-аминокислот приводит к образованию пептидов. При взаимодействии двух α-аминокислот образуется дипептид.

Межмолекулярная реакция с участием трех α-аминокислот приводит к образованию трипептида и т.д.

Фрагменты молекул аминокислот, образующие пептидную цепь, называются аминокислотными остатками, а связь CO–NH - пептидной связью.

Изоэлектрической точкой аминокислоты называют значение pH, при котором максимальная доля молекул аминокислоты обладает нулевым зарядом. При таком pH аминокислота наименее подвижна в электрическом поле, и данное свойство можно использовать для разделения аминокислот, а также белков и пептидов. Цвиттер-ионом называют молекулу аминокислоты, в которой аминогруппа представлена в виде -NH₃⁺, а карбоксигруппа — в виде -COO⁻. Такая молекула обладает значительным дипольным моментом при нулевом суммарном заряде. Именно из таких молекул построены кристаллы большинства аминокислот. Аминокислоты делятся на протеиногенные (входят в состав белков) и непротеиногенные (не участвуют в синетезе белка). Различают ароматические (фенилаланин, тирозин, триптофан) и алифатические (моноаминомонокарбоновые: глицин, аланин, валин, изолейцин, лейцин. Оксимоноаминокарбоновые: серин, треонин. Моноаминодикарбоновые: аспартат, глутамат. Амиды моноаминодикарбоновых: аспарагин, глутамин. Диаминомонокарбоновые: лизин, аргинин) аминокислоты, а также аминокислоты, содержащие серу (цистеин, метионин) или гидроксильные группы. Часто классификация основана на природе заряда аминокислоты. Если радикал нейтральный (такие аминокислоты содержат только одну амино- и одну карбоксильную группы), то они называются нейтральными аминокислотами. Если аминокислота содержит избыток амино- или карбоксильных групп, то она называется соответственно основной или кислой аминокислотой.

2) Глюконеогенез — процесс образования в печени и отчасти в корковом веществе почек (около 10 %) молекул глюкозы из молекул других органических соединений — источников энергии, например свободных аминокислот, молочной кислоты, глицерина. Свободные жирные кислоты у млекопитающих для глюконеогенеза не используются. Суммарное уравнение глюконеогенеза: 2 CH₃COCOOH + 4ATP + 2GTP + 2NADH^.H⁺ + 6 H₂O = C₆H₁₂O₆ + 2NAD + 4ADP + 2GDP + 6P_n

Первые стадии реакционной цепи протекают в митохондриях. Причиной такого «обходного» пути является неблагоприятная константа равновесия пируваткиназной реакции. Для перевода пирувата непосредственно в фосфоенолпируват(PEP) недостаточно энергии расщепления АТФ. Пируват, образующийся из лактата или аминокислот, переносится в матрикс митохондрий и там карбоксилируется в оксалоацетат в биотинзависимой реакции, катализируемой пируваткарбоксилазой. Оксалоацетат является промежуточным метаболитом цитратного цикла. Поэтому аминокислоты, которые включаются в цитратный цикл или конвертируются в пируват, могут непосредственно превращаться в глюкозу. Оксалоацетат, образующийся в митохондриальном матриксе, восстанавливается в малат, который может переноситься в цитоплазму с помощью специальных переносчиков. Оксалоацетат может также переноситься из митохондрии в цитоплазму после переаминирования в аспартат. В цитоплазме малат вновь превращается цитоплазматической малатдегидрогеназой в оксалоацетат, который в реакции, катализируемой ГТФ-зависимой РЕР-карбоксикиназой, переводится в фосфоенолпируват. Последующие стадии до фруктозо-1,6-дифосфата представляют собой модификации соответствующих реакций гликолиза. При этом для образования 1,3-дифосфоглицерата дополнительно расходуется АТФ. Две глюконеогенез-специфичные фосфатазы отщепляют по очереди фосфатные остатки от фруктозо-1,6-дифосфата. Промежуточной стадией является изомеризация фруктозо-6-фосфата в глюкозо-6-фосфат, одна из реакций гликолиза. Глюкозо-6-фосфатаза печени является мембранным ферментом, локализованным внутри гладкого эндоплазматического ретикулума. Перенос глюкозо-6-фосфата в эндоплазматический ретикулум и возврат образующейся глюкозы в цитоплазму осуществляется специфическими переносчиками. Из цитоплазмы глюкоза поступает в кровь.

3 )Методы определения белка. 1.Биуретовая реакция на пептидную группу (реакция Пиотровского)

Реакция основана на способности пептидной группы белков и полипептидов образовывать в щелочной среде с ионами Сu²⁺ комплексное соединение фиолетового цвета с красным или синим оттенком в зависимости от количества пептидных связей. Биуретовая реакция положительна с белками и пептидами, имеющими не менее двух пептидных связей. Биуретовую реакцию дают аспарагин, гистидин, а также небелковые вещества, содержащие не менее двух пептидных групп, например, производное мочевины — биурет давший название этой реакции. Пептидная группа в щелочной среде присутствует в своей таутомерной енольной форме. При избытке щёлочи происходит диссоциация ОН-группы, появляется отрицательный заряд, и медь, взаимодействуя с кислородом, образует ковалентную связь, а взаимодействуя с атомами азота, – координационные связи. Опыт: в пробирку вносят 1 мл раствора яичного белка, 1-2 мл 10% раствора гидроксида натрия (NaOH) и 1-2 капли 5% раствора сульфата меди (CuSO₄). При встряхивании появляется сине-фиолетовое окрашивание.

2. Ксантопротеиновая реакция на ароматическое кольцо циклических аминокислот (реакция Мульдера)

Реакция основана на способности присутствующих в молекуле белка ароматических аминокислот (тирозина, фенилаланина и триптофана) образовывать с концентрированной азотной кислотой при подогревании динитропроизводные соединения жёлтого цвета. В щелочной среде они переходят в хиноидные структуры, имеющие оранжевое окрашивание. Например, в реакции с тирозином образуется динитротирозин, добавление гидроксида натрия приводит к образованию натриевой соли хиноидной структуры динитротирозина. Реакция получила название ксантопротеиновой от греч. xanthos — жёлтый. Опыт:К 1 мл раствора яичного белка в вытяжном шкафу приливают 5-6 капель концентрированной азотной кислоты (HNO₃). Выпадает осадок, который при осторожном подогревании приобретает жёлтую окраску. После охлаждения в пробирку добавляют по каплям 10% раствор гидроксида натрия до появления оранжевого окрашивания. Образование жёлтых пятен на коже при попадании азотной кислоты обусловлено этой реакцией. Ксантопротеиновая реакция не протекает с белками, не содержащими ароматических аминокислот (желатином).

3. Реакция на триптофан (Адамкевича). Реакция основана на способности триптофана в кислой среде реагировать с глиоксиловой кислотой с образованием соединения, окрашенного в красно-фиолетовый цвет. При нагревании две молекулы триптофана (I) взаимодействуют с глиоксиловой кислотой (II) с образованием окрашенного соединения (III):

Для проведения реакции используют ледяную (конц) уксусную кислоту, в которой всегда в небольшом количестве присутствует глиоксиловая кислота. В качестве водоотнимающего средства в реакции используется концентрированная серная кислота. К 1 мл раствора яичного белка приливают 1 мл концентрированной уксусной кислоты (СН₃СООН), 2 капли 5% раствора сульфата меди, перемешивают и осторожно нагревают до растворения выпавшего осадка, после чего содержимое пробирки охлаждают. Очень осторожно по стенке, наклонив пробирку, приливают 1 мл концентрированной серной кислоты (Н₂SO₄). При стоянии на границе двух слоев появляется красно-фиолетовое кольцо, которое постепенно распространяется на весь раствор. Появление окраски можно ускорить, поместив пробирку в кипящую водяную баню.

4. Реакция Фоля на аминокислоты, слабосвязанную серу (цистин, цистеин). Реакция основана на способности белков, содержащих цистин и цистеин, в щелочной среде при нагревании образовывать сульфид натрия (Na₂S), который с плюмбитом натрия даёт бурое окрашивание. К 1 мл раствора яичного белка прилить 2-3 мл 10% раствора гидроксида натрия и вскипятить. В горячий раствор добавить небольшое количество кристаллического уксуснокислого свинца [Pb(CH₃COO)₂]. Раствор темнеет вследствие образования сульфида свинца (PbS). Интенсивность окрашивания зависит от концентрации раствора белка и содержания в нем цистеина и цистина.

5.ИССЛЕДОВАНИЕ ДЕНАТУРАЦИИ БЕЛКОВ. Денатурация белка –разрушение четвертичного, третичного и вторичного уровней организации. Денатурация приводит к изменению биологических и физико-химических свойств белка. При этом белок становится менее гидрофильным и легко осаждается. Денатурация чаще всего необратима, но в ряде случаев удаление денатурирующих факторов приводит к восстановлению исходной конформации молекулы белка и его природных свойств — ренатурации.

1) Высаливание – процесс осаждения белков солями щелочных и щелочно-земельных металлов. Этот процесс является обратимым и сохраняет нативные свойства белков. Высаливание можно проводить также и нейтральными солями, например, (NH₄)₂SO₄. Все вещества этого типа нейтрализуют заряд белковых частиц и вызывают их дегидратацию, что ведёт к осаждению белка без изменения нативной структуры. Белки отличаются друг от друга зарядом и гидрофильностью, поэтому можно разделить белки, используя для их осаждения разные концентрации солей.

К 1 мл раствора белка прибавляют кристаллический сернокислый аммоний ((NH₄)₂SO₄) до насыщения. При этом белок выпадает в осадок. Обратимость процесса высаливания (растворение осадка белка) проверить добавлением дистиллированной воды.

2) Денатурация белка солями тяжёлых металлов. Катионы тяжёлых металлов образуют прочные связи с полярными группами белка, в результате чего разрушается пространственная структура и происходит осаждение денатурированного белка. При добавлении избытка солей тяжёлых металлов происходит растворение первоначально образующегося осадка из-за адсорбции иона металла и приобретения вследствие этого белковой молекулой положительного заряда. К 1 мл раствора яичного белка приливают 1-2 капли 5% раствора сульфата меди и сразу перемешивают. Выпадает осадок, не растворяющийся при добавлении воды.

3) Денатурация белка концентрированными минеральными кислотами. Минеральные кислоты вызывают нейтрализацию зарядов белковых молекул, что приводит к денатурации и осаждению белка. При избытке всех минеральных кислот, за исключением азотной, выпавший осадок белка растворяется. Реакция с концентрированной азотной кислотой используется для обнаружения белка в моче. В пробирку наливают 1 мл концентрированной азотной кислоты (HNO₃) и осторожно, держа пробирку под углом 45°, наслаивают 1 мл раствора яичного белка. На границе двух слоев жидкостей образуется осадок денатурированного белка в виде белого кольца.

4) Тепловая денатурация белка. Почти все белки денатурируют при нагревании. Механизм тепловой денатурации связан с усилением теплового движения полипептидных цепей. Это приводит к разрыву водородных и гидрофобных связей. При выпадении в осадок денатурированного при нагревании белка важную роль играет концентрация водородных ионов. Наиболее полное и быстрое осаждение происходит в ИЭТ белка. В сильнокислых и сильнощелочных растворах денатурированный при нагревании белок не выпадает в осадок, так как молекулы белка перезаряжаются и несут в первом случае положительный, во втором случае отрицательный заряд, что повышает их устойчивость в растворе в результате электростатических сил отталкивания и обусловливает наличие гидратной оболочки вокруг молекулы. Ход работы: в четыре пронумерованные пробирки наливают по 1 мл 1% раствора сывороточного альбумина. Содержимое первой пробирки нагревают (контроль). Жидкость мутнеет, но так как частицы денатурированного белка несут заряд, они удерживаются во взвешенном состоянии. В пробирку №2 добавляют 1 каплю 0,2М раствора уксусной кислоты и нагревают. Выпадает осадок белка вследствие того, что подавляется кислотная диссоциация, и белок приближается к изоэлектрическому состоянию. В пробирку №3 добавляют несколько капель концентрированной уксусной кислоты и содержимое нагревают. Осадка белка не образуется даже при кипячении, так как в сильнокислой среде молекулы белка перезаряжаются, приобретая положительный заряд. В пробирку №4 добавляют 1 каплю 10% раствора гидроксида натрия и нагревают. Осадок белка не образуется даже при кипячении, так как в щелочной среде отрицательный заряд на частице белка усиливается.

14 билет.

нуклеозидфосфаты, фосфорные эфиры нуклеозидов. Состоят из азотистого основания (обычно пуринового или пиримидинового), углевода рибозы (рибонуклеотиды) или дезоксирибозы (дезоксирибонуклеотиды) и одного или неск. остатков фосфорной к-ты. Соединения из двух остатков Н. наз. динуклеотидами, из нескольких — олигонуклеотидами, из множества — полинуклеотидами. Н. входят в состав нуклеиновых к-т (полинуклеотиды), важнейших коферментов (НАД, НАДФ, ФАД, КоА) и др. биологически активных соединений. Свободные Н. в виде нуклеозидмоно-, ди- и трифосфатов в значит, кол-вах содержатся в живых клетках. Нуклеозидтрифосфаты — Н., содержащие 3 остатка фосфорной к-ты, являются богатыми энергией (макроэргическими) соединениями, источниками и переносчиками химич. энергии фосфатной связи. Особую роль играет АТФ — универсальный аккумулятор энергии, обеспечивающий разл. процессы жизнедеятельности. Высокоэнергетич. фосфатные связи нуклеозидтрифосфатов используются в синтезе полисахаридов (уридинтрифосфат, АТФ), белков (ГТФ, АТФ), липидов (цитидинтрифосфат, АТФ). Нуклеозидтрифосфаты являются также субстратами для синтеза нуклеиновых к-т. Уридиндифосфат участвует в обмене углеводов в качестве переносчика остатков моносахаридов, цитидиндифосфат (переносчик остатков холина и этаноламина) — в обмене липидов. Важную регуляторную роль в организме играют циклические нуклеотиды. Свободные нуклеозидмонофосфаты образуются путём синтеза или при гидролизе нуклеиновых к-т под действием нуклеаз. Последовательное фосфорилирование нуклеозидмонофосфатов приводит к образованию соответствующих нуклеозидди- и нуклеозидтрифосфатов. Распад Н. происходит под действием нуклеотидаз (при этом образуются нуклеозиды), а также нуклеотидпирофосфорилаз, катализирующих обратимую реакцию расщепления Н. до свободных оснований и фосфорибозилпирофосфата.

НУКЛЕОЗИДЫ, прир. гликозиды, молекулы к-рых состоят из остатка пуринового или пиримидинового основания, связанного через атом N с остатком D-рибозы или 2-дезок-си-D-рибозы в фуранозной форме; в более широком смысле-прир. и синтетич. соед., в молекулах к-рых гетероцикл через атом N или С связан с любым моносахаридом, иногда сильно модифицированным. В зависимости от входящих в молекулу остатков моносахари-да и гетероциклич. основания различают рибо- и дезокси-рибонуклеозиды, пуриновые и пиримидиновые нуклеозиды.

Канонические нуклеозиды (см.рис.)-аденозин (сокращенно А), гуанозин (G), цитидин (С), их 2'-дезоксианалоги, а также тимидин (Т) и уридин (U)-являются компонентами нуклеиновых кислот. В природе нуклеозиды встречаются также в своб. состоянии (преим. в виде нуклеозидных антибиотиков).

бета окисление жир кислот,баланс энергии

Деградация жирных кислот: β-окисление

А. Деградация жирных кислот: β-окисление

После попадания в клетки жирные кислоты активируются путем образования ацил-КоА Для этого нужны две богатые энергией ангидридные связи АТФ. В матрикс митохондрий активированные жирные кислоты попадают в виде ацилкарнитина, который является трансмембранным переносчиком.

Деградация жирных кислот происходит в митохондриальном матриксе путем окислительного цикла реакций, при котором последовательно отщепляются С₂-звенья в виде ацетил-КоА (активированной уксусной кислоты). Последовательное отщепление ацетильных групп начинается с карбоксильного конца активированных жирных кислот каждый раз между С-2 (α-атомом) и С-3 (β-атомом). Поэтому цикл реакций деградации называется β-окислением. Пространственно и функционально β-окисление тесно связано с цитратным циклом и дыхательной цепью.

Первая стадия β-окисления — дегидрирование активированной жирной кислоты (ацил-КоА) с образованием β-ненасыщенной жирной кислоты с двойной связью в транс-конфигурации (реакция [1]: дегидрирование). При этом оба атома водорода с электронами переносятся от фермента [1] на электронпереносящий флавопротеин (ETF). ETF-дегидрогеназа (5) переносит восстановительные эквиваленты на убихинон (кофермент Q), который является составной частью дыхательной цепи. Вторая стадия деградации жирной кислоты состоит в присоединении молекулы воды к двойной связи ненасыщенной жирной кислоты (реакция [2]: гидратирование). На третьей стадии происходит окисление гидроксильной группы при С-3 в карбонильную группу (реакция [3]:дегидрирование). Акцептором для восстановительных эквивалентов является НАД⁺ который передает их в дыхательную цепь. На четвертой стадии активированная β-кетокислота расщепляется ацилтрансферазой (β-кетотиолазой) в присутствии кофермента А (реакция [4]: тиолитическое расщепление). Продуктами реакции являются ацетил-КоА и активированная жирная кислота, углеродная цепь которой короче на два углеродных атома по сравнению с длиной цепи исходной жирной кислоты.Для полной деградации длинноцепочечной жирной кислоты цикл должен многократно повторяться; например, для стеарил-КоА (18:0) необходимы восемь циклов. Образующийся ацетил-КоА может переноситься на оксалоацетат с образованием цитрата, промежуточного метаболита цитратного цикла При избытке ацетил-КоА в печени образуются кетоновые тела..

Энергетический баланс деградации жирных кислот Для расчета энергетического баланса деградации жирной кислоты в качестве примера рассмотрим молекулу пальмитиновой кислоты (16:0), которая окисляется полностью до 16 молекул СО₂. На первой стадии жирная кислота активируется, потребляя две богатые энергией связи [АТФ (АТР)], с образованием пальмитоил-СоА состоящего из восьми C₂-звеньев. Затем протекают семь циклов β-окисления. При этом образуются 7 молекул восстановленной формы флавопротеина (ETF) и 7 молекул НАДН + Н⁺. Оба соединения включаются в дыхательную цепь; окисление ETF через убихинон дает в итоге 1,5 молекулы АТФ, а НАДН + Н⁺ — 2,5 молекулы). Таким образом, β-окисление одного пальмитоильного остатка дает 28 молекул (7 х 4) АТФ. Окисление каждой молекулы ацетил-КоА приводит к образованию 10 молекул АТФ, что означает получение еще 80 молекул (8 x 10) АТФ. Из 28 + 80 молекул АТФ следует вычесть две молекулы АТФ, израсходованные при активации пальмитиновой кислоты. Итак, при утилизации одной молекулыпальмитиновой кислоты синтезируются 106 молекул АТФ, что соответствует свободной энергии 3300 кДж/моль (106 х 30,5 кДж/мольАТФ). Выигрыш в энергии при деградации жирных кислот существенно выше по сравнению с распадом углеводов (32 молекулы АТФ на 1молекулу глюкозы) и белков даже с учетом больших размеров молекул. Поэтому жиры представляют собой очень выгодную форму сохранения энергии.

3. Цветные реакции на белки Цветные реакции применяются для установления белковой природы веществ, идентификации белков и определение их аминокислотного состава в различных биологических жидкостях. В клинической лабораторной практике эти методы используются для определения количества белка в плазме крови, аминокислот в моче и крови, для выявления наследственных и приобретенных патологий обмена у новорожденных. Биуретовая реакция на пептидную связь. В основе ее лежит способность пептидных связей (-CO-NH-) образовывать с сульфатом меди в щелочной среде окрашенные комплексные соединения, интенсивность окраски которых зависит от длины полипептидной цепи. Раствор белка дает сине-фиолетовое окрашивание.Реактивы:1) яичный белок, 1% раствор (белок куриного яйца фильтруют через марлю и разводят дистиллированной водой 1:10);2) NaOH, 10% раствор;3) Cu(OH)2, 1% раствор. Ход определения. В пробирку вносят 5 капель раствор яичного белка, 3 капли NaOH, 1 каплю Cu(OH)2, перемешивают. Содержимое пробирки приобретает сине-фиолетовое окрашивание. Нингидриновая реакция. Сущность реакции состоит в образовании соединения, окрашенного в сине-фиолетовый цвет, состоящего из нингидрина и продуктов гидролиза аминокислот. Эта реакция характерна для аминогрупп в -положении, присутствующих в природных аминокислотах и белках.Реактивы:1) яичный белок, 1% раствор;2) нингидрин, 0,5% водный раствор Ход определения. В пробирку вносят 5 капель раствора яичного белка, затем 5 капель нингидрина, нагревают смесь до кипения. Появляется розово-фиолетовое окрашивание, переходящее с течением времени в сине-фиолетовое. Ксантопротеиновая реакция. При добавлении к раствору белка концентрированной азотной кислоты и нагревании появляется желтое окрашивание, переходящее в присутствии щелочи в оранжевое. Сущность реакции состоит в нитровании бензольного кольца циклических аминокислот азотной кислотой с образованием нитросоединений, выпадающих в осадок. Реакция выявляет наличие в белке циклических аминокислот.Реактивы:1) яичный белок, 1% раствор;2) концентрированная азотная кислота;3) NaOH,10% раствор. Ход определения. К 5 каплям раствора яичного белка добавляют 3 капли азотной кислоты и (осторожно!) нагревают. Появляется осадок желтого цвета. После охлаждения добавляют (желательно на осадок) 10 капель NaOH, появляется оранжевое окрашивание. Реакция Фоля. Аминокислоты, содержащие сульфгидрильные группы - SH, подвергаются щелочному гидролизу с образованием сульфида натрия Na2S. Последний, взаимодействуя с плюмбитом натрия (образуется в ходе реакции между ацетатом свинца и NaOH), образует осадок сульфида свинца PbS черного или бурого цвета.

Реактивы:1) яичный белок, 1% раствор;2) реактив Фоля (к 5% раствору ацетата свинца прибавляют равный объем 30% раствора NaOH до растворения образовавшегосяосадка). Ход определения. К 5 каплям раствора белка прибавляют 5 капель реактива Фоля и кипятят 2-3 мин. После отстаивания 1-2 мин. появляется черный или бурый осадок.

Билет № 15