Количественное определение оксида углерода (ii) в крови

Содержание оксида углерода (II) в крови определяют по количеству карбоксигемоглобина. Для этой цели может быть использован спектрофотометрический метод, предложенный В. Ф. Крамаренко, Б. А. Собчуком и Т. Н. Гладышевской, который приведен в «Методических указаниях о количественном определении карбоксигемоглобина и карбоксимиоглобина» (1974).

Поступивший в организм оксид углерода (II) связывается с дезокси- и оксигемоглобином, вследствие чего образуется карбоксигемоглобин (COHb). Метгемоглобин не связывается с оксидом углерода (II) в крови. Однако в лабораторных условиях при помощи дитионита натрия (Na ₂ S ₂ O ₄ ·2H ₂ O) или других восстановителей метгемоглобин можно перевести в дезоксигемоглобин.

В ряде источников литературы дитионит натрия встречается под названием «гидросульфит натрия».

Все перечисленные выше соединения гемоглобина (дезоксигемоглобин, оксигемоглобин и карбоксигемоглобин) можно обнаружить по их спектрам поглощения в видимой области в пределах длин волн от 450 до 620 нм. Спектры поглощения оксигемоглобина и карбоксигемоглобина незначительно отличаются друг от друга. В связи с этим спектральные характеристики указанных соединений трудно использовать для их количественного определения. Значительно отличаются друг от друга спектры поглощения дезоксигемоглобина и карбоксигемоглобина. Поэтому различие этих спектров используется для количественного определения карбоксигемоглобина в крови.

Для количественного спектрофотометрического определения оксида углерода (II) по карбоксигемоглобину приготовляют ряд растворов: раствор А — раствор исследуемой крови; раствор Б — раствор крови, содержащей смесь карбоксигемоглобина и дезоксигемоглобина; раствор В — раствор крови, в которой все формы гемоглобина (дезоксигемоглобин, оксигемоглобин и метгемоглобин) полностью переведены в карбоксигемоглобин.

Чтобы избежать частичного разложения карбоксигемоглобина работа с содержащими его растворами должна производиться вдали от естественных и искусственных источников света с минимальным доступом воздуха.

Приготовление раствора А. 1 мл исследуемой трупной крови, не содержащей сгустков, вносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и прибавляют фосфатный буферный раствор (рН = 7,38). Жидкость взбалтывают и объем ее доводят фосфатным буферным раствором до 100 мл. Полученный при этом раствор крови должен быть прозрачным.

Приготовление раствора Б. Этот раствор готовят из раствора А непосредственно в кювете спектрофотометра перед измерением оптической плотности. С этой целью в кювету вносят раствор исследуемой крови (раствор А) в таком количестве, чтобы после закрытия кюветы крышкой между ней и жидкостью не было воздуха. К раствору А, внесенному в кювету, прибавляют 3—4 мг дитионита натрия (Na ₂ S ₂ O ₄ ·H ₂ O). Содержимое кюветы тщательно перемешивают тонкой стеклянной палочкой. При этом оксигемоглобин и метгемоглобин восстанавливаются до дезоксигемоглобина, а карбоксигемоглобин с дитионитом натрия не реагирует. После прибавления дитионита натрия раствор должен быть прозрачным.

Приготовление раствора В. Этот раствор получают в специальном приборе, представленном на рис. 9. Применяемый для этой цели прибор состоит из колбы 1, закрытой пробкой, снабженной капельной воронкой 2 и отводной стеклянной трубкой для выхода оксида углерода (II) из колбы, четырех склянок Дрек-селя (3, 4, 5, 6) и отводной трубки 7. Колбу и склянки Дрекселя соединяют между собой резиновыми трубками. При отсутствии склянок Дрекселя их можно заменить колбами вместимостью 50 мл, отверстия которых закрыты пробками, снабженными двумя стеклянными трубками.

В колбу 1 вносят 50 мл концентрированной серной кислоты, а в капельную воронку 2 — 10 мл муравьиной кислоты. В склянку 3 вносят 10 %-й раствор гидроксида натрия, в склянки 4 и 6 — дистиллированную воду, а в склянку 5 — раствор А исследуемой крови в фосфатной буферной смеси. В склянки 3, 4, 5 и 6 вносят столько жидкости, чтобы трубки погружались на 2 см в жидкость.

Из капельной воронки 2 в подогретую колбу / по каплям приливают муравьиную кислоту. Интенсивность выделения оксида углерода (II) регулируют скоростью приливания муравьиной кислоты. По мере расходования муравьиной кислоты выделение газа замедляется. В начале опыта для увеличения скорости выделения оксида углерода (II) колбу осторожно нагревают на небольшом пламени газовой горелки.

Учитывая высокую токсичность оксида углерода (II), при работе с ним необходимо соблюдать осторожность. Получение оксида углерода (II) и насыщение крови этим газом должно производиться в вытяжном шкафу с хорошей тягой.

Оксид углерода (II) из колбы 1 пропускают через склянки Дрекселя в течение 15 мин. За это время оксигемоглобин крови полностью превращается в карбоксигемоглобин. Однако при этом в растворе может оставаться некоторое количество метгемоглобина, который необходимо перевести в дезоксигемоглобин, а затем в карбоксигемоглобин. С указанной целью после пятиминутного пропускания оксида углерода (II) от прибора отсоединяют склянку 5, в которую вносят 5—7 мг дитионита натрия, и жидкость хорошо взбалтывают. (Осторожно! Не вдыхать оксид углерода (II)!). Затем склянку 5 присоединяют к прибору и в течение 5 мин пропускают оксид углерода (II). После насыщения оксидом углерода (II) раствор крови, содержащий карбоксигемоглобин, должен быть прозрачным.

При количественном определении оксида углерода (II) необходимо измерять оптическую плотность раствора крови, содержащего смесь карбоксигемоглобина и дезоксигемоглобина, а затем измерять оптическую плотность раствора крови, насыщенного оксидом углерода (II). Этот раствор не должен содержать дезоксигемоглобина, оксигемоглобина и метгемоглобина.

Дезоксигемоглобин имеет максимум светопоглощения при длине волны, равной 557 нм, а карбоксигемоглобин имеет 2 максимума светопоглощения при длинах волн 541 и 571 нм. При наложении спектральных кривых карбоксигемоглобина и дезоксигемоглобина на одном графике отмечается появление трех изобестических точек (а, б, в) при длинах волн 550, 565 и 580 нм. В этих точках пересечения спектральных кривых оптические плотности растворов карбоксигемоглобина и дезоксигемоглобина одинаковы (рис. 10).

Прежде чем приступить к определению карбоксигемоглобина спектрофотометрическим методом, на графике, на который нанесены спектры поглощения карбоксигемоглобина и дезоксигемоглобина, необходимо найти длину волны, при которой расстояние между обеими спектральными кривыми (карбоксигемоглобина и дезоксигемоглобина) будет наибольшим вблизи первого максимума поглощения карбоксигемоглобина (т. е. при длине волны, равной 541 нм). На основании экспериментальных данных эта наибольшая разница значений оптических плотностей растворов карбоксигемоглобина и дезоксигемоглобина имеет место при длине волны, равной 538 нм.

В кювету спектрофотометра с толщиной слоя жидкости 1 см вносят исследуемый раствор крови (раствор А), прибавляют 3— 4 мг дитионита натрия и поступают так, как указано при описании способа получения раствора Б. Оптическую плотность этого раствора измеряют при длинах волн, равных 538 и 550 нм. Затем измеряют оптическую плотность раствора крови, в которой весь гемоглобин переведен в карбоксигемоглобин (раствор В) при длине волны, равной 538 нм. При измерении оптической плотности обоих растворов крови раствором сравнения является вода.

Приготовление сульфида аммония (см. Приложение 1, реактив 73).

Приготовление фосфатного буферного раствора для определения карбоксигемоглобина (см. Приложение 1, реактив 74).

Расчет содержания карбоксигемоглобина в исследуемой крови в процентах Ρ производят по формуле

где D _COHb — оптическая плотность раствора В крови, дополнительно насыщенного оксидом углерода (II) (при 538 нм); D _HbCOHb — оптическая плотность раствора Б крови, обработанного дитионитом натрия, содержащего смесь дезокси- и карбоксигемоглобина (при 538 нм); D _HbI — оптическая плотность раствора Б крови в изобестической точке (при 550 нм); К — коэффициент 0,372.

Величина ошибки определения карбоксигемоглобина в пределах концентраций от 3 до 20 % составляет ±3%, при концентрациях свыше 20 % погрешность примерно равняется ± 5 %.

Вариант метода спектрофотометрического определения карбоксигемоглобина в крови предложили Л. П. Букина и Л. И. Ушакова (Судебно-медицинская экспертиза, 1979, № 2). Предложенный ими вариант метода аналогичен описанному выше. Однако, согласно варианту метода, предложенного Л. П. Букиной и Л. И. Ушаковой, не требуется насыщения крови оксидом углерода (II) при каждом определении карбоксигемоглобина.

Судебно-медицинская оценка результатов количественного определения карбоксигемоглобина в крови по Г. А. Сыцянко (Научно-исследовательский институт судебной медицины МЗ СССР) приведена ниже.

Содержание карбоксигемоглобина в крови зависит прежде всего от концентрации оксида углерода (II) во вдыхаемом воздухе и времени его воздействия. Концентрация карбоксигемоглобина в крови тем выше, чем выше парциальное давление оксида углерода (II) в альвеолярном воздухе по сравнению с парциальным давлением кислорода.

За один и тот же промежуток времени при прочих равных условиях в организм поступает оксида углерода (II) тем больше, чем больше минутный объем дыхания. Симптомы, обусловленные разной коицетрацией карбоксигемоглобина в крови, тяжесть и исход отравления представлены ниже в табл. 9. Эти данные имеют ориентировочное значение.

Однако наблюдения и специальные исследования показывают, что соответствие между концентрацией карбоксигемоглобина и тяжестью отравления имеется не всегда. Это особенно отчетливо проявляется при групповых отравлениях.

Смертельная концентрация карбоксигемоглобина в крови составляет в среднем около 60 %, но может колебаться от 40 до 80 % и более. Это колебание обусловлено как влиянием внешних условий, так и особенностями организма.

Более подробно судебно-медицинская оценка результатов количественного определения карбоксигемоглобина приведена в упомянутых выше «Методических указаниях о количественном определении карбоксигемоглобина и карбоксимиоглобина».

ПРИЛОЖЕНИЕ 1. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАКТИВОВ

1. Барбитуровая кислота (раствор в пиридине). В колбу вносят 3 г барбитуровой кислоты, прибавляют 15 мл свежеперегнанного пиридина и 3 мл концентрированной соляной кислоты. Содержимое колбы хорошо взбалтывают, прибавляют воду до 50 мл и фильтруют. Этот реактив должен быть свежеприготовленным.

2. Баритовая вода. 5 г гидроксида бария взбалтывают со 100 мл свеже-прокипяченной, а затем охлажденной дистиллированной воды. Этот раствор должен быть свежеприготовленным.

3. Бромная вода. Этот реактив представляет собой насыщенный раствор брома в воде. В склянку с притертой пробкой вносят 3 г брома и 100 мл воды. Смесь интенсивно взбалтывают и оставляют на несколько часов для разделения слоев жидкостей. Верхний прозрачный слой жидкости сливают в склянку из оранжевого стекла с притертой пробкой. Реактив сохраняют в защищенном от света месте.

4. Бумага иодкрахмальная. Небольшое количество рисового или картофельного крахмала тщательно перемешивают с небольшим количеством воды. Полученную суспензию малыми порциями вливают в кипящую воду, перемешивают стеклянной палочкой и продолжают кипятить до получения прозрачного раствора. К охлажденному раствору крахмала прибавляют немного чистого иодида калия. Этим раствором пропитывают полоски фильтровальной бумаги, которые затем высушивают.

5. Бумага, пропитанная ацетатом свинца. К 5%-му раствору ацетата свинца прибавляют 5%-й раствор гидроксида натрия до растворения образующегося осадка. В полученный раствор на 1—2 мин погружают полоски фильтровальной бумаги, которые затем высушивают на воздухе.

6. Бумага, пропитанная бензидином. Приготовляют раствор, содержащий 0,286 г ацетата меди в 100 мл воды (раствор А), и насыщенный раствор ацетата бензидина. К 47,5 мл насыщенного раствора ацетата бензидина прибавляют 52,5 мл воды (раствор Б). Затем смешивают равные объемы растворов А и Б. В этой жидкости смачивают полоски фильтровальной бумаги, которые высушивают на воздухе.

7. Бумага, пропитанная раствором бромида или хлорида ртути (II). Нарезанные кусочки фильтровальной бумаги пропитывают 5%-м спиртовым раствором бромида или хлорида ртути (II). Затем эту бумагу высушивают при комнатной температуре (в вытяжном шкафу) и сохраняют в скляике с притертой пробкой в темном прохладном месте. Бумагу можно применять в качестве реактива не более одного месяца со дня приготовления.

8. Вата, пропитанная раствором ацетата свинца. К 10 г основного ацетата свинца прибавляют 100 мл воды, а затем по каплям прибавляют уксусную кислоту до получения прозрачного или слегка опалесцирующего раствора. Этим раствором смачивают гигроскопическую вату, которую высушивают на воздухе. Высушенную вату сохраняют в склянке с притертой пробкой.

9. Гидроксостибиат калия (раствор). В 100 мл горячей воды растворяют 2,2 г гидроксостибиата калия. Полученный раствор кипятят в течение 2 мии. После охлаждения к раствору прибавляют 3,5 мл 6 н. раствора гидроксида калия. Жидкость оставляют на сутки, а затем фильтруют.

10. Гипохлорит натрия. Для приготовления гипохлорита натрия описано несколько способов:

а) в ступку вносят 20 г хлорной извести, прибавляют 100 мл холодной воды и хорошо смешивают, затем прибавляют 500 мл 5%-го раствора карбоната натрия. Жидкость хорошо перемешивают и оставляют на некоторое время. Прозрачную жидкость сливают с осадка и фильтруют.

б) через 5%-й раствор гидроксида натрия пропускают газообразный хлор до насыщения раствора этим газом.

11. Дииодокупрат калия (в растворе иода). В 3 мл воды растворяют 0,3 г сульфата меди, прибавляют 1 мл концентрированной соляной кислоты и 3 г иодида калия. Жидкость взбалтывают и прибавляют воду до 10 мл. Через сутки с осадка сливают жидкость и применяют ее в качестве реактива, представляющего собой смесь раствора иода и дииодокупрата калия (K[CuI ₂ ]).

12. Дитизон (раствор в хлороформе или в четыреххлористом углероде). Дитизон (дифенилтиокарбазон) представляет собой кристаллы в виде топких игл сине-черного цвета с фиолетовым оттенком. В воде он практически нерастворим. Легко растворяется в органических растворителях. В растворах дитизон проявляет способность к кето-енольной таутомерии.

Товарный дитизон может содержать примеси дифенилтиокарбадиазона (продукт окисления дитизона), дитизонатов некоторых металлов и других веществ. Окраска этих примесей мешает обнаружению ионов металлов с помощью дитизона. Поэтому перед приготовлением раствора дитнзона его подвергают очистке.

В 150 мл хлороформа или четыреххлористого углерода растворяют 0,2 г дитизона и через 5—10 мин фильтруют. Фильтрат собирают в делительную воронку вместимостью 500 мл, прибавляют 50 мл 3 н. раствора аммиака и взбалтывают. При этом водный слой, содержащий аммонийную соль дитизона, приобретает желтую или оранжевую окраску, а хлороформный слой, в котором содержится дифенилтиокарбадиазон,— коричневую или красно-бурую окраску. Затем от хлороформного слоя отделяют водную фазу и взбалтывают ее с новыми порциями хлороформа до тех пор, пока водный слой не будет иметь неизменяющуюся желтую окраску. После этого отделяют водную фазу и к ней (при охлаждении льдом) прибавляют 2—3 г аскорбиновой кислоты и 4 н. раствор серной кислоты до рН = 3...4. Выделившийся при этом дитизон из водной фазы несколько раз экстрагируют хлороформом (по 15 мл). Экстракцию дитизона новыми порциями хлороформа проводят до тех пор, пока последняя хлороформная вытяжка не перестанет окрашиваться в зеленый цвет. После этого хлороформные вытяжки соединяют и доводят их хлороформом до 200 мл. Этот раствор, содержащий 0,1 % дитизона, имеет зеленую окраску. Его сохраняют в холодном месте в склянке из темного стекла. На поверхность хлороформного раствора дитизона наносят слой 0,2 н. раствора серной кислоты толщиной 0,5 см.

13. Дихромат калия (раствор). К 0,37 г дихромата калия прибавляют 15 мл воды. После растворения дихромата калия осторожно прибавляют 28 мл концентрированной серной кислоты. Раствор охлаждают и прибавляют воду до 65 мл.

14. Диэтилдитиокарбамат свинца (раствор в хлороформе). К 0,5 г ацетата свинца прибавляют воду до его растворения. К полученному раствору прибавляют 25 мл 10 %-го раствора нитрата калия. Смесь этих растворов переносят в делительную воронку и прибавляют 50 мл 1 %-го раствора диэтилдитиокарбамата аммония (или натрия). Содержимое делительной воронки несколько раз взбалтывают с новыми порциями хлороформа (по 50 мл) до тех пор, пока осадок не растворится и не перейдет полностью из водной фазы в хлороформный слой. Полученные при этом хлороформные вытяжки соединяют, доводят хлороформом до 250 мл, фильтруют и применяют в качестве реактива.

15. Диэтилдитиокарбамат серебра (раствор в пиридине). В 200 мл воды растворяют 3 г диэтилдитиокарбамата натрия. К этому раствору прибавляют 50 мл 7 %-го раствора нитрата серебра. Выпавший желтый осадок отфильтровывают через воронку Бюхнера и высушивают между листами фильтровальной бумаги. Из этого осадка приготовляют 0,5 %-й раствор в пиридине. Полученный раствор годен к употреблению 10 сут. Его сохраняют в прохладном месте в склянке из темного стекла.

16. Иодид калия (раствор в серной кислоте и этиловом спирте). К 3 г иодида калия прибавляют 1 мл концентрированной серной кислоты, 5 мл этилового спирта (96°) и 8 мл воды.

17. Иодид меди (I) (суспензия). В 100 мл воды растворяют 21,2 г иодида калия. К этому раствору прибавляют 100 мл 16 %-го раствора сульфата меди (II). Образовавшийся осадок иодида меди (I) отстаивают, а затем осторожно сливают жидкость. Осадок несколько раз взбалтывают с водой, затем с 2 н. раствором сульфата натрия и снова с водой. Осадок, отмытый от иода, промывают насыщенным раствором сульфата натрия для коагуляции частичек этого осадка. Жидкость с осадка переносят на бумажный фильтр. Осадок на фильтре промывают водой, а затем переносят в цилиндр, прибавляют 100 мл воды и взбалтывают. Полученную таким образом суспензию иодида меди (I) сохраняют в склянке из темного стекла.

18. Иод сублимированный. В фарфоровой ступке растирают 1 г иодида калия, 2 г оксида кальция и 6 г иода. Смесь переносят в тонкостенный стакан и помещают его на песочную баню. Стакан накрывают часовым стеклом, наливают на него небольшое количество воды, а затем нагревают. При этом иод возгоняется и оседает на охлажденном водой стекле в виде игольчатых кристаллов. Сублимированный иод хранят в эксикаторе над хлоридом кальция. Шлиф эксикатора не следует смазывать вазелином.

19. Иод дважды сублимированный. В фарфоровой ступке тщательно растирают 1 г иодида калия, 2 г оксида кальция и 6 г иода, очищенного путем однократной сублимации. Смесь переносят в тонкостенный стакан, помещают его на песочную баню и проводят сублимацию, как указано выше (см. иод сублимированный). Дважды сублимированный иод хранят в эксикаторе над хлоридом кальция. Шлиф эксикатора не следует смазывать вазелином.

20. Кобальтинитрит натрия (раствор). В 50 мл воды растворяют 23 г нитрита натрия. К этому раствору прибавляют 3 г нитрата кобальта (III), 20 мл 5 н. раствора уксусной кислоты, а затем воду до 100 мл. Полученный раствор оставляют на сутки, затем фильтруют. Реактив используют свежеприготовленным.

21. Метиловый фиолетовый (раствор). В 400 мл воды растворяют 0,5 г метилового фиолетового, прибавляют 5 мл концентрированной соляной кислоты, 12,1 г сульфата натрия и еще 5 мл концентрированной соляной кислоты. Жидкость оставляют на 8 ч, затем прибавляют 5 г активированного угля, хорошо взбалтывают и фильтруют. Фильтрат разбавляют водой до 500 мл. Этот реактив пригоден к употреблению в течение двух месяцев после приготовления.

22. α-Нафтол (раствор). В 40 %-м этиловом спирте растворяют 0,05 г α-нафтола, а затем объем жидкости доводят тем же спиртом до 100 мл.

23. β-Нафтол (раствор). В 40 мл 10 %-го раствора гидроксида натрия растворяют 2 г β-нафтола и прибавляют воду до 100 мл. Этот раствор используют свежеприготовленным.

24. Нильский голубой (спиртовой раствор). Нильский голубой относится к красителям оксазинового ряда. Спиртовой 0,1 %-й раствор нильского голубого применяется в качестве индикатора, синяя окраска которого при рН= 10,1... 11,1 переходит в красную. Близкий интервал перехода окраска имеет ализариновый желтый Р, желтая окраска которого при рН= 10,1...12,1 переходит в лиловую.

25. Нитрат висмута (раствор). К 0,43 г нитрата висмута прибавляют 30 мл ледяной уксусной кислоты и взбалтывают. К полученному раствору прибавляют воду до 150 мл.

26. Нитрат меди (аммиачный раствор). В небольшом объеме воды растворяют 1 г нитрата меди (I) и 4 г гидрохлорида гидроксиламииа, прибавляют 5 мл 20 %-го раствора аммиака. Жидкость взбалтывают до обесцвечивания, а затем прибавляют воду до 50 мл.

27. Пиридин свежеперегнанный. В товарном пиридине могут быть примеси, мешающие обнаружению и количественному определению ряда веществ

с помощью этого реактива. Для очистки пиридина от примесей применяется несколько способов. Приводим один из них. Пиридин в течение суток настаивают с гранулами гидроксида калия. После этого пиридин сливают в высушенную колбу аппарата для перегонки жидкостей. В эту колбу прибавляют оксид бария и отгоняют пиридин на глицериновой бане. Отогнанный пиридин сохраняют в склянках с притертой пробкой.

Другие способы получения очищенного свежеперегнанного пиридина подробно описаны в ряде источников (см. например, А. Губен-Вейль. Методы органической химии: В 2-х т.—М.: Химия, 1967.—Т. 2. 1032 с).

28. Пиридии-родаиидный реактив. Этот реактив представляет собой смесь равных объемов 50 %-го водного раствора пиридина и 20 %-го водного раствора роданида аммония.

29. Реактив Бушарда. В 10—15 мл воды растворяют 2 г иодида калия. К полученному раствору прибавляют 1,27 г иода. После растворения иода прибавляют воду до 100 мл.

30. Реактив Вагиера. В 10—15 мл воды растворяют 2 г иодида калия. К этому раствору прибавляют 1 г иода. После растворения иода прибавляют воду до 50 мл.

31. Реактив Грисса. Для получения этого реактива приготовляют 2 раствора: 1 %-й раствор сульфаниловой кислоты в 30 %-м растворе уксусной кислоты (раствор А) и 0,1 %-й раствор α-нафтиламина в 30 %-м растворе уксусной кислоты (раствор Б). Перед употреблением смешивают равные объемы растворов А и Б. Реактив применяется для обнаружения нитритов.

32. Реактив Драгеидорфа. В 20 мл азотной кислоты (пл. 1,18) растворяют 8 г основного нитрата висмута. Полученный раствор вливают в раствор, содержащий 27,2 г иодида калия в 30 мл воды. Через несколько дней жидкость фильтруют и разбавляют водой до 100 мл.

33. Реактив Драгендорфа, модифицированный по Муиье. В 10 мл ледяной уксусной кислоты растворяют 0,85 г основного нитрата висмута и прибавляют 40 мл воды. К этой жидкости прибавляют раствор, содержащий 8 г иодида калия в 20 мл воды. Перед употреблением берут 1 мл указанного раствора, прибавляют к нему 2 мл ледяной уксусной кислоты и 10 мл воды.

34. Реактив Зоннеишейиа. К раствору моногидрофосфата натрия прибавляют раствор молибдата аммония в азотной кислоте. Образовавшийся осадок отфильтровывают и растворяют в небольшом объеме раствора карбоната натрия. Раствор выпаривают досуха, сухой остаток прокаливают, а затем охлаждают. К остатку прибавляют десятикратное количество воды и азотную кислоту до растворения осадка.

35. Реактив Майера. К 1,35 г хлорида ртути (II) прибавляют 20 мл 25 %-го раствора иодида калия. После растворения хлорида ртути прибавляют воду до 100 мл.

36. Реактив Марки. К 1 мл концентрированной серной кислоты прибавляют каплю формалина и охлаждают. Этот реактив используют свежеприготовленным.

37. Реактив Маиделина. К 0,01 г ванадата аммония прибавляют 2 мл концентрированной серной кислоты. Реактив должен быть свежеприготовленным.

38. Реактив Марме. В горячем растворе, содержащем 10 г иодида калия в 30 мл воды, растворяют 5 г иодида кадмия. Полученный раствор смешивают с равным объемом насыщенного раствора иодида калия.

39. Реактив Миллона. Этот реактив представляет собой смесь нитратов одно- и двухвалентной ртути, которая содержит примесь азотистой кислоты. Описано несколько способов приготовления реактива Миллона:

а) 10 г нитрата ртути (I) растворяют в 8,5 мл концентрированной азотной кислоты. Полученный раствор разбавляют двойным объемом воды;

б) 10 г металлической ртути растворяют в 15 мл концентрированной азотной кнслогы и прибавляют 30 мл воды. Прозрачный раствор сливают и применяют в качестве реактива.

40. Реактив Несслера. В 50 мл воды растворяют 50 г иодида калия. К этому раствору при постоянном перемешивании прибавляют насыщенный раствор хлорида ртути (II) (6 г хлорида ртути (II) в 100 мл воды) до появления устойчивого осадка иодида ртути. Затем прибавляют 200 мл 6 н. ра-

створа гидроксида калия и воду до 500 мл. Реактив сохраняют в темном месте.

41. Реактив Триидлера. 4 г хлорида ртути (II) при нагревании растворяют в 85 мл воды, раствор охлаждают, прибавляют 12 мл 1 н. раствора соляной кислоты и 4 г нитрата железа (III). После растворения нитрата железа объем жидкости доводят водой до 100 мл.

42. Реактив Фелинга: а) 34,66 г перекристаллизованного сульфата меди растворяют в воде, подкисленной 2—3 каплями разбавленной серной кислоты, и прибавляют воду до 500 мл (раствор А). Затем к 173 г сегнетовой соли прибавляют 50 г гидроксида натрия и растворяют в 400 мл воды. Этот раствор доводят водой до 500 мл (раствор Б). Перед употреблением смешивают равные объемы растворов А и Б;

б) 7 г сульфата меди растворяют в 100 мл воды. К этому раствору прибавляют раствор, содержащий 14 г гидроксида натрия и 36 г сегнетовой соли в 100 мл воды.

43. Реактив Фолина — Чиокальто. К 100 г вольфрамата натрия прибавляют воду до растворения (раствор А). К 25 г молибдата натрия также прибавляют иоду до растворения (раствор Б). Растворы А и Б смешивают и прибавляют воду до 700 мл. Эту жидкость переносят в колбу вместимостью 1500 мл, в которую прибавляют 50 мл 85 %-го раствора фосфорной кислоты и 100 мл концентрированной соляной кислоты. Колбу закрывают пробкой, снабженной обратным холодильником, а затем содержимое колбы беспрерывно кипятят в течение 10 ч. После указанного времени жидкость охлаждают, прибавляют 150 г сульфата лития, 50 мл дистиллированной воды и 3—5 капель брома. Жидкость в колбе кипятят без холодильника в течение 15 мин (для удаления избытка брома). После охлаждения жидкости ее переносят в колбу и добавляют воду до 1000 мл. Раствор хорошо взбалтывают и фильтруют. Фильтрат собирают в склянку из темного стекла с притертой пробкой. Реактив сохраняют в холодном месте. Он пригоден к употреблению в течение нескольких месяцев. Перед употреблением реактив разбавляют водой (1:3).

44. Реактив Форреста. Смешивают 25 мл 0,2 %-го раствора дихромата калия с 25 мл 30 %-го раствора серной кислоты, прибавляют 25 мл 20 %-го раствора хлорной кислоты НClО ₄ и 25 мл 50 %-го раствора азотной кислоты.

45. Реактив ФПН. К 5 мл 5 %-го раствора хлорида железа (III) прибавляют 45 мл 20 %-го раствора хлорной кислоты и 50 мл 50 %-го раствора азотной кислоты.

46. Реактив Фреде. К растертому в порошок молибдату аммония (или натрия) прибавляют концентрированную серную кислоту. Смесь интенсивно взбалтывают. Полученный насыщенный раствор молибденовой кислоты в концентрированной серной кислоте сливают с осадка. Реактив используют свежеприготовленным. При стоянии реактив может изменять свою окраску.

47. Реактив Шейблера. К 20 мл 25 %-го раствора вольфрамата натрия прибавляют 10 мл 25 %-го раствора фосфорной кислоты и хорошо перемешивают.

48. Реактив Эрдмана. К 20 мл концентрированной серной кислоты прибавляют 10 капель 15 %-й азотной кислоты и взбалтывают.

49. Роданид кобальта (раствор). Смешивают 1 г нитрата кобальта (II) и 4 г роданида калия. Смесь этих веществ растворяют в 20 мл воды.

50. Сернистая кислота (раствор). Сернистая кислота является малоустойчивой. Ее приготовляют непосредственно перед употреблением. С этой целью через холодную воду пропускают ток оксида серы (IV), который получают в специальном аппарате при взаимодействии серной кислоты с сульфитом натрия. Полученный раствор в 5—10 раз разбавляют водой и применяют в качестве реактива.

51. Соль Мора (раствор). К 0,1 г соли Мора прибавляют 0,5 мл 25 %-го раствора соляной кислоты, а затем воду до 100 мл. К 5 мл полученного раствора прибавляют 4 г хлорида аммония и воду до 100 мл.

52. Сульфаииловая кислота диазотироваииая. В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят 5 мл раствора сульфаниловой кислоты (4,5 г сульфаниловой кислоты и 45 мл концентрированной соляной кислоты в 500 мл воды).

Колбу охлаждают льдом и прибавляют 2,5 мл 10 %-го раствора нитрита натрия. Смесь оставляют на льду на 5 мин, затем прибавляют еще 10 мл 10 %-го раствора нитрита натрия, взбалтывают, оставляют на льду в течение 5 мин и объем раствора доводят водой до метки.

53. Сульфат меди (раствор в аммиаке и пиридине). К 10 мл 3 %-го раствора сульфата меди по каплям прибавляют 25%-й раствор аммиака до полного растворения образующегося осадка. После этого прибавляют еще несколько капель 3 %-го раствора сульфата меди до получения нерастворимого осадка, к которому по каплям прибавляют свежеперегнанный пиридин до растворения осадка. К полученному раствору еще прибавляют пиридин из расчета 5—8 капель на каждые 10 мл раствора.

54. Сульфат ртути (раствор). К 5 г оксида ртути прибавляют 10 мл концентрированной серной кислоты и 100 мл воды. После растворения оксида ртути объем жидкости доводят водой до 250 мл.

55. Тетрароданомеркуроат (II) аммония. Смешивают 5 г хлорида ртути (II) и 5 г роданида аммония. Полученную смесь растворяют в 60 мл воды.

56. Фуксинсернистая кислота (раствор): а) 0,2 г химически чистого основного фуксина растворяют в 120 мл горячей воды. После охлаждения раствора к нему прибавляют 6 г безводного сульфита натрия, растворенного в 20 мл воды, н 4 мл соляной кислоты (пл. 1,18). Затем жидкость доводят водой до 200 мл и фильтруют. Профильтрованную жидкость переносят в склянку из темного стекла с притертой пробкой. Реактив должен быть бесцветным или слабожелтоватого цвета;

б) через 0,1 % раствор фуксина пропускают ток оксида серы (IV) до обесцвечивания жидкости.

57. Хлорид железа (III) (раствор, содержащий иодид калия). К 3 мл 10 %-го раствора хлорида железа (III) прибавляют 1 мл концентрированной соляной кислоты и 3 г иодида калия, а затем прибавляют воду до Ю мл. Через сутки реактив сливают с осадка и сохраняют в склянке из темного стекла.

58. Хлорид олова (II) (раствор). К 5,65 г хлорида олова (II) прибавляют 2 мл концентрированной соляной кислоты (пл. 1,18) и нагревают на водяной бане (80 °С) до растворения соли. Раствор охлаждают и прибавляют воду до 100 мл.

59. Хлорная вода. Реактив представляет собой насыщенный раствор хлора в воде. Хлорную воду получают пропусканием тока хлора через воду. Склянки наполняют хлорной водой почти доверху и сохраняют в прохладном, защищенном от света месте.

60. Хлорцинкиод. Растворяют 2 г хлорида цинка в 10 мл воды (раствор А). В другой склянке растворяют 2,1 г иодида калия в 5 мл воды. В полученной жидкости растворяют 0,1 г дважды сублимированного иода (раствор Б). К раствору А прибавляют по каплям при перемешивании раствор Б. К смеси растворов А и Б прибавляют несколько кристаллов дважды сублимированного иода. Через сутки прозрачную жидкость переносят в склянку из оранжевого стекла.

61. Цинк «купрированный». Цинк, не содержащий мышьяка, хорошо промывают водой и высушивают на воздухе. Затем на несколько секунд (до потемнения) его опускают в 0,05 %-й раствор сульфата меди. После этого цинк промывают водой и высушивают на воздухе.

62. Цинк-уранилацетат (раствор). К 55 мл воды прибавляют 10 г ацетата уранила, 30 г ацетата цинка и 9 мл 6 н. раствора уксусной кислоты. Эту смесь нагревают до растворения реактива, а затем прибавляют воду до 100 мл. Через 24 часа полученный раствор фильтруют и применяют его в качестве реактива.

63. Аммиакат серебра (водно-ацетоновый раствор). 0,5 г нитрата серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды. К этому раствору прибавляют 5 мл концентрированного аммиака, а затем объем жидкости доводят ацетоном до 100 мл.

64. Аммиачная буферная смесь. Растворяют 10 г хлорида аммония в 50 мл 25 %-го раствора аммиака.

65. Бромид натрия (раствор, содержащий хлорид меди). К 4 г бромида натрия прибавляют 0,1 г хлорида меди и 5,9 мл воды.

66. Бромфеноловый синий (раствор, содержащий нитрат серебра). К 10 мл 0,5 %-го раствора бромфенолового синего в ацетоне прибавляют 90 мл 0,5 %-го раствора нитрата серебра в смеси воды и ацетона (1:3). Полученный раствор сохраняют в темном месте. Он пригоден к употреблению в течение 15 сут после приготовления.

67. Дитизонат этилмеркурхлорида (хлороформный раствор). В делительную воронку вносят 10 мл 0,05 %-го хлороформного раствора этилмеркурхлорида, прибавляют 20 мл ацетатной буферной смеси (рН-4,5), 10 мл воды и 1 мл 0,01 %-го хлороформного раствора дитизона. Смесь взбалтывают 2—3 мин, а затем отделяют хлороформный слой. Водную фазу в делительной воронке еще взбалтывают с новыми порциями 0,01 %-го хлороформного раствора дитизона (по 1 мл) до тех пор, пока последняя порция этого раствора не перестанет изменять окраску из зеленой в желтую. Хлороформные вытяжки соединяют и выпаривают досуха в струе холодного воздуха. Сухой остаток растворяют в 0,5 мл хлороформа. Полученный раствор используют в качестве раствора «свидетеля» при хроматографическом определении гранозана.

68. Индикаторная смесь для обнаружения органических соединений фосфора. К 5 мл лошадиной сыворотки прибавляют 15 мл воды, 0,5 мл 0,1 и. раствора гидроксида натрия и 1,25 мл 0,6 %-го раствора бромтимолового синего в 0,1 н. растворе гидроксида натрия.

69. Иод (раствор в иодиде калия) 3 г иодида калия растворяют в 4 мл воды, прибавляют 0,25 г сублимированного иода. Смесь взбалтывают до растворения иода, а затем прибавляют воду до 100 мл.

70. Молибдат аммония (раствор). 5 г молибдата аммония растворяют в 100 мл воды, по каплям прибавляют концентрированную азотную кислоту до тех пор, пока не растворится выделяющийся при этом белый осадок.

71. Пероксид водорода в смеси со щелочью. К 3 мл 0,5 %-го водного раствора гидроксида натрия прибавляют 2 мл 3 %-го раствора периоксида водорода.

72. Смесь сульфата меди, сульфита натрия и гидрокарбоната натрия (раствор). Приготовляют 10%-й раствор сульфата меди (II). 30%-й раствор сульфита натрия и 8 %-й раствор гидрокарбоната натрия. Затем смешивают 10 мл раствора сульфата меди (II), 20 мл раствора сульфита натрия и 15 мл раствора гидрокарбоната натрия.

73. Сульфид аммония (раствор). Через 60 мл 2 н. раствора гидроксида аммония в течение 15—20 мин пропускают сероводород. После этого прибавляют еще 40 мл 2 н. раствора гидроксида аммония.

74. Фосфатный буферный раствор (рН = 7,38). Для приготовления этого раствора применяют моногидрофосфат натрия и дигидрофосфат калия.

В одной колбе в литре дистиллированной воды растворяют 11,876 г моногидрофосфата натрия. В другой колбе в одном литре дистиллированной воды растворяют 9,078 г дигидрофосфата калия. В мерную колбу вместимостью 500 мл вносят 20 мл раствора моногидрофосфата натрия и 5 мл раствора дигидрофосфата калия, а затем прибавляют дистиллированную воду до метки.