Питательные среды и культивирование

Исследование анаэробных микроорганизмов осуществляется в несколько этапов. Общая схема выделения и идентификации анаэро­бов представлена на рисунке 1.

Важным фактором развития анаэробной бактериологии является наличие коллекции типовых штаммов бактерий, включая референсштаммы из коллекций АТСС, CDC, VPI. Особенно это важно для контроля питательных сред, для биохимической идентификации чис­тых культур и оценки активности антибактериальных препаратов. Имеется широкий спектр основных сред, которые используются для приготовления специальных питательных сред для анаэробов.

Питательные среды для анаэробов должны отвечать следующим основным требованиям: 1) удовлетворять питательным потребно­стям; 2) обеспечивать быстрый рост микроорганизмов; 3) быть адек­ватно редуцированными. Первичный посев материала осуществляет­ся на чашки с кровяным агаром или элективные среды, приведенные в таблице 7.

Все чаще выделение облигатных анаэробов из клинического ма­териала осуществляется на средах, которые включают селективные агенты в определенной концентрации, позволяющие выделить опре­деленные группы анаэробов (20, 23) (таблица 8).

Длительность инкубирования и частота исследования засеянных чашек зависит от исследуемого материала и состава микрофлоры (таблица 9).

Исследуемый материал Отделяемое ран, Содержимое абсцессов, Трахеобронхональный аспират и др.   Транспортировка в лабораторию: в киприце, в специальной транспортной среде (немедленное помещение материала в среду)   Микроскопия материала     Окраска по Граму

Культивирование и выделение чистой культуры Аэробные чашки для 35±2°С сравнения с 18- 28 часов анаэробами 5-10 % С02 1. Кровяной агарМикроаэростат Газ-Пак (Н2 + С02) 35±2°С от 48 ч до 7 днейми 2. Кровяной агар Шедлера 35±2°С от 48 ч до 7 дней 3. Селективная среда для эдентификации анаэробов от 48 ч до 2-х недель 4. Жидкая среда (тиогликолевая)

Идентифика-ция. Чистые культуры из изолированных колонии 1.Окраска по Граму и Ожешко для выявлления спор 2.Морфология колоний 3.Связь типа колонии с кислородом 4.Предварительная дифференциация по чувствительности к антимикробным препаратам 5.Биохимические тесты   Определение чувствительности к антибиотикам 1.Метод разведения в агаре или бульоне 2.Метод бумажных дисков (диффузии)

Рис. 1. Выделение и идентификация анаэробных микроорганизмов

 

Т а б л и ц а 7. Среды рекомендуемые для первичного выделения

Анаэробных микроорганизмов

Среда	Назначение
Кровяной агар для бруцелл (CDC анаэробный кровяной агар, кровяной агар Шэдлера) (BRU agar)	Неселективная, для выделения анаэробов, присутствующих в материале
Желчно-эскулиновый агар для бактероидов (ВВЕ agar)	Селективная и дифференциаль­ная; для выделения бактерий группы Bacteroides fragilis
Канамицин-ванкомицин кровяной агар (KVLB)	Селективная для большинства неспорообразующих грамотрицательных бактерий
Фенил-этиловый агар (PEA)	Ингибирует рост протея и дру­гих энтеробактерий; стимули­рует рост грамположительных и грамотрицательных анаэробов
Тиогликолевый бульон (THIO)	Для специальных ситуаций
Желточный агар (EYA)	Для выделения клостридий
Циклосерин-цефокситин-фруктозный агар (CCFA) или циклосеринманнитовый агар (СМА) или циклосеринманнитовый кровяной агар (СМВА)	Селективная для С. difficile
Кристалл-виолет-эритромици-новый агар (СVЕВ)	Для выделения Fusobacterium nucleatum и Leptotrichia buccalis
Бактероид гингивалис агар(BGA)	Для выделения Porphyromonas gingivalis