Вопрос 52. Возбудитель коклюша

/. Морфология, биология, кулыпуральные свойства возбудителя коклюша

2. Устойчивость к физическим и химическим факторам

3. Антигенное строение, патогенность, вирулентность

1. Возбудитель коклюша — Bordetella pertussis — был выделен из мокроты ребенка, больного коклюшем, в 1906 г. Борде и Жангу. В 1937 г. был описан микроб от больного коклюшем, сходный, но не идентичный с бактерией пертуссис (коклюша), назван­ный бактерией парапертуссис (паракоклюша). Морфология: короткая грамотрицательная овоидной формы па­лочка размером 0,2 на 0,4—1,2 мкм. При окраске толуидиновым синим обнаруживаются биполярно расположенные метахрома-тические гранулы. У палочки коклюша можно обнаружить также капсулу.

Биология палочки, культуральные свойства: свежевыделенные культуры коклюшных микробов, S-форма, или 1 фаза по Лесли и Гарднеру, растут только на питательной среде, состоящей из картофельно-глицеринового агара с добавлением крови {среда Барде-Жангу).

Колонии палочки коклюша гладкие, блестящие, прозрачные, ку­полообразные с жемчужным или ртутным оттенком, размером около 1 мм в диаметре. Колонки бактерии паракоклюша по внешнему виду очень похожи на бактерии коклюша, но они более крупные по размерам и появляются раньше, чем кок­люшные колонии.

Бактерии коклюша, так же как атипичные и паракоклюшные, растут на обычных питательных средах. На полусинтетической среде — казеиново-угольном агаре (КУА) — колонии коклюш­ных микробов мелкие (0,5—1 мм), выпуклые, четко контуриро-ванные, блестящие, гладкие, серовато-кремового цвета и вяз­кой консистенции.

Колонии коклюшных и паракоклюшных микробов на среде Борде-Жангу окружены характерной зоной гемолиза (зона не­резко отграничена и распространяется диффузно в окружаю­щую среду). Коклюшные микробы не редуцируют сахара, не образуют индола, не редуцируют нитратов и не используют цитратов. Коклюшный микроб - факультативный аэроб. Оп­тимальные условия культивирования 35-36 °С.

Дифференциальными признаками бактерии пертуссис и бакте­рии парапертуссис служат данные серологических исследова­ний (реакция агглютинации и биохимическая характеристика). Основные отличительные признаки, позволяющие дифферен­цировать коклюшные и паракоклюшные культуры: паракок-люшные растут при первых пересевах на простом агаре (без крови), на казеиново-угольном агаре и мясо-пептонном агаре (особенно с добавлением тирозина), а также на кусочке карто­феля, образуя коричневый пигмент, расщепляют мочевину, утилизируют цитраты.

Коклюшный микроб на простом агаре не растет, пигмента не образует и мочевину не расщепляет. Кроме того, антительной сывороткой коклюшные и паракоклюшные возбудители агглю­тинируются примерно до Vio титра. Также ставят пробу на уреазу — в пробирку с исследуемой культурой добавляют моче­вину и фенолфталеин, пробирку встряхивают и ставят в термо­стат. Реакция (изменение цвета) может наступить через 15— 20 мин. Окончательный результат учитывается через 2 ч. По­ложительная реакция — окрашивание жидкости в малиновый цвет — свойственна культурам паракоклюшных бактерий.

2. Устойчивость к физическим и химическим факторам. Кок­люшный микроб — облигатный паразит, вне организма он со­храняется очень недолго. В сухой мокроте — несколько часов; при температуре 50—55 °С погибает в течение 30 мин. Очень чувствителен к УФ-свету и химическим антисептикам. Кок­люшные и паракоклюшные микробы (в меньшей степени) чувст­вительны к антибиотикам. Наиболее эффективными из них яв­ляются полимиксин, левомицитин, стрептомицин и биомицин.

3. Антигенное строение. Коклюшный микроб по антигенным свойствам однотипен, но отличается сложностью антигенного строения — у него удается выявить до 12 антигенных компо­нентов. Коклюшный микроб имеет собственные видовые анти­гены и общие с паракоклюшными. Общие антигены имеются как у обоих видов (О-антиген), так и отдельно с каждым из них. Из коклюшных микробов были выделены фракции, обла­дающие иммунологическими свойствами: агглютиноген, ге-магглютинин и протективный антиген.

Патогенность, вирулентность, образование токсина. В естест­венных условиях к коклюшу восприимчив только человек. Наиболее близкая по симптоматике к коклюшу картина забо­левания была экспериментально воспроизведена у обезьян. Куриные эмбрионы, крысы и морские свинки при введении культуры погибают от интоксикации. Внутрикожное введение культуры коклюшных микробов экспериментальным животным вызывают образование некроза в результате освобождения при разрушении микробных клеток ее токсичных компонентов.

 

Вопрос 53. Лабораторная диагностика коклюша

1. Забор и посев материала

2. Бактериологическое исследование

3. Серологические исследования

1.Лабораторная диагностика коклюша. Материалом для исследо­вания служит слизь, выделяемая при кашле. В выделениях ды­хательного тракта больного коклюшем бактерии могут быть обнаружены посевом во всех стадиях болезни, но особенно в ранний период заболевания. Материал для посева может быть получен 2 способами:

• методом "кашлевых пластинок";

• путем забора материала носоглоточным тампоном. Кашлевые пластинки — в момент появления кашля открытую чашку с питательной средой подносят на расстоянии 8—10 см ко рту ребенка и держат ее так в течение нескольких секунд (6—8 кашлевых толчков). Желательно посев делать на 2 чашки. После забора материала⁴ чашку закрывают как можно быстрее, для того чтобы избежать загрязнения. Чашку помещают в тер­мостат.

Посев носоглоточным тампоном. Стерильный тампон вводят в ноздрю ребенка до задней стенки глотки, где снимают слизь. Взятие материала тампоном через рот со шпателем более сложная и неприятная для ребенка процедура и не имеет пре­имуществ перед носоглоточным тампоном. Извлеченным из ноздри тампоном немедленно делают посев на чашки с пита­тельной средой. Посев должен быть сделан в течение 1-2 ч по­сле забора материала.

2. Бактериологическое исследование. Наилучший рост палочка коклюша дает на питательных средах с добавлением большого количества крови. Таковы среды:

• картофельно-глицериновый агар с 20—30% крови по Борде-Жангу;

• молочно-кровяной агар;

• среда на казеиновом гидролизате с 25% крови.

Можно пользоваться средой на казеиновом гидролизате и с меньшим количеством крови. Для подавления роста сопутст­вующей микрофлоры к питательным средам прибавляют рас­творы пенициллина, к которому палочка коклюша нечувстви­тельна. Чашки с посевом оставляют в термостате при 37 "С на 2—3 суток. Через 48—72 ч просматривают чашки. При наличии большого количества характерных колоний из них делают маз­ки, которые окрашивают по Грому, ставят на предметном стек­ле реакцию агглютинации с антительной сывороткой, разве­денной 1: 10. Если на чашке появляются единичные колонии, делают пересев в пробирку со скошенной средой. Используют те же питательные среды. Через 24—48 ч роста в термостате ис­следуют мазки, окрашенные по Граму, и ставят реакцию агглю­тинации на предметном стекле. Идентификацию микробов коклюша проводят на основании морфологических, биохими­ческих, серологических, токсических и патогенных свойств выделенных культур.

3. Серологические исследования: серологическая реакция (агглюти­нация, связывание комплемента и опсано-фагоцитарная реак­ция) в некоторой мере помогает подтвердить диагноз при ати­пичном течении коклюша (появляются антитела со 2—3-й не­дели заболевания в низких титрах), а также установить его ретроспективно.

В условиях массовой иммунизации против коклюша значение этих серологических показателей весьма ограниченно.

Для получения агглютинирующей сыворотки применяют имму­низацию кроликов.