Определение фекального загрязнения воды по коли-индексу.

Коли-индекс — количественные показатели фекального загрязнения воды, пищевых продуктов, почвы и других объектов окружающей среды, основанные на исследовании содержания в них кишечной палочки.

Коли-индекс — количество кишечных палочек, обнаруживаемое на 1 л жидкости. Для определения коли-индекса используют метод мембранных фильтров. Сущность метода мембранных фильтров заключается в фильтровании определенных объемов исследуемой жидкости (или твердого вещества, разведенного в воде) через мембранные фильтры №2 или №3, на которых задерживаются бактерии. Фильтры переносят на чашки со средой Эндо, инкубируемые при t° 37°, а затем исследуют выросшие на поверхности фильтра темно-красные с металлическим блеском, розовые и прозрачные колонии. Из колоний каждого типа готовят мазки и окрашивают их по Граму. Колонии разных типов проверяют на оксидазную активность, которая должна быть отрицательной. Бесцветные и розовые колонии дополнительно засевают на полужидкую среду с глюкозой и индикатором, на которой в течение 24-часовой инкубации при t° 37° должны образовываться кислота и газ. Для определения коли-индекса подсчитывают выросшие на фильтре колонии кишечной палочки и затем проводят перерасчет на 1 л.

 

29)заражение эксперемент-х животных(биол.метод)-в\б

Экспериментальное заражение лабораторных животных производится с целью:

- выделения из исследуемого материала чистой культуры возбудителя болезни,

- определения вида бактерий при диагностике болезни, т.е. идентификации;

- определения вирулентности;

- испытания на эффективность вакцин и лечебных сывороток.

Принцип метода:

А)Заражение-в/б

Б)оснащение: 1.исс.материал.(ЧК)

2. лаб.животное- белая мышь

3. инструменты.

Ход работы: 1. Приготовить взвесь исс.культуры

2. набрать взвесь в шприц (2мл)

3. зафиксировать животное в положении брюшком вверх, головой вниз под углом 45гр, диафрагма смещается к гр. Полости

4.проколоть левую паховую обл. перпендикулярно и вводить под углом 45гр. 0,5-1мл. перед введением кожу обработать спиртом и йодом, после тоже самое.

5. животное промаркировать.

30) метод выявления ф. верулентности, адгезивности, капсулообр-я, аг-инг. Фагоцитоза.

А)Вирулентность определяют путем выявления факторовпатогенности, заражения экспериментальных животных, культур ткани или на экспериментальных моделях.

В     настоящее время для определения вирулентности стараются не использовать лабораторных животных (в связи с высокой стоимостью исследования и по этическим соображениям). С этой целью широко применяются другие методы определения вирулентности заражение культур тканей, куриных эмбрионов, культур простейших.

Б)Тест на адгезины. В адгезии бактерий принимают участие различные компоненты оболочки. Это свойство выявля­ют по способности исследуемого микроорганизма сорбироваться на различных эукариотических клетках (эритроциты, энтероциты) или других частицах (латекс). Еще один метод обнаружения адгезинов связан с их использованием в качестве антигенов в се­рологических реакциях. У эшерихий адгезивные свойства часто определяют по их способности агглютинировать эритроциты.

В лунки планшетов вносят по 50 мкл 4%-й суспензии отмытых эритроцитов морской свинки, 1%-й раствор D-маннозы, суспен­зию исследуемых бактерий с концентрацией клеток 109/мл. Па­раллельно ставят реакцию в отсутствие маннозы. Результат учи­тывают через 30...60 мин. Положительная реакция — склеивание и оседание эритроцитов в виде «зонтика». Торможение агглюти­нации маннозой обозначают как маннозочувствительную ГА (гемагглютинация), отсутствие ингибирования — как маннозорезистентную ГА.

В)Метод выявления капсулообразования in vitro

 

Для изучения капсулообразования in vitro делают посевы нескольких капель исходной испытуемой взвеси в среду Государственного контрольного института медицинских биологических препаратов им. Тарасевича (ГКИ) и ставят в термостат при 37 °C.

Через 30 - 120 минут начинается капсулообразование in vitro. Следует считать, что через 16 - 18 часов все или абсолютное большинство B. anthracis, если таковые находятся в исследуемом материале, образуют на среде ГКИ капсулу.

Для наблюдения за капсулообразованием мазки из культур со среды ГКИ после подсыхания и фиксации в течение 15 минут метанолом окрашивают 5 - 10 минут синькой Леффлера и просматривают в микроскопе (х900). Микробы окрашиваются в синий цвет, а капсула - в розовый.