Методы микробиологической диагностики заболеваний (микроскопический, серологический, бактериальный, аллергический, биологический и молекулярно-генетический), их характеристика.

Билет 15

Плазмиды. Классификация, свойства, использование в генной инженерии.

Плазмиды — дополнительные факторы наследственности, расположенные в клетках вне хромосом и представляющие собой кольцевые (замкнутые) или линейные молекулы ДНК.

Плазмиды способны удваиваться (реплицироваться) автономно, но при этом они эксплуатируют репликационную систему клетки хозяина. Большинство плазмид кодирует специальные белки — инициаторы репликации. Эти белки начинают процесс репликации, который затем подхватывается и продолжается репликационной системой клетки. Существует несколько систем классификации плазмид, базирующихся на:

• топологии (линейные или кольцевые),
• механизмах репликации (см. выше),
• маркерных генах, содержащихся на плазмидах (например: устойчивость к антибиотикам, гены биодеградации ксенобиотиков, системы рестрикции — модификации, гены синтеза бактериоцинов и т. д. — или полному отсутствию оных — криптические плазмиды),
• круге хозяев,
• копийности,
• совместимости,
• конъюгативные (способные к переносу в другие клетки)/неконъюгативные.

Вне зависимости от типа, все плазмиды содержат точку инициации репликации (ori V).

Плазмиды широко используются в генной инженерии для переноса генетической информации и генетических манипуляций. Для этого создаются искусственные плазмиды — векторы, состоящие из частей, взятых из разных генетических источников, а также из искусственно созданных фрагментов ДНК.

Присутствие плазмид в клетках может быть объяснено преимуществами, которые дают плазмидные гены клетке-хозяину (возможность расти в присутствии антибиотика, использование более широкого круга субстратов, защита от бактериофагов, устранение конкурентов путем синтеза бактериоцинов) или же теорией эгоистичной ДНК, как в случае криптических плазмид (т. е. плазмида поддерживается благодаря своей приспособленности к условиям внутри клетки). Некоторые плазмиды, содержащие так называемые островки патогенности, придают бактериям патогенные свойства.

Методы выделения и культивирования вирусов. Типы клеточных структур, применяемых в вирусологии.

Билет 16

Патогенные риккетсии. Таксономия. Свойства, состав и метаболизм. Культивирование. Роль патогенных риккетсий.

Порядок: Rickettsiales, Семейство Rickettsiaceae, род Rickettsia

Морфология: полиморфные прокариоты, не образуют капсул и спор. Грам-.

Жизненный цикл – 2 стадии: покоящаяся и вегетативная (внутриклеточная).

Покоящаяся форма: повышенная резистентность, округлые клетки мелкого размера с утолщенной клеточной стенкой, уплотненной цитоплазмой.

Вегетативная форма размножается путем бинарного деления в цитоплазме или ядре клетки-хозяина.

Облигатный внутриклеточный энергетический паразит, не способный синтезировать кофермент НАД.

Выделяют 4 морфологические формы по Здродовскому: кокковидная 0.4 мкм диаметром, палочковидная (1-2мкм), бациллярная (4 мкм), нитевидная (до 40 мкм).

Содержат большое количество липидов и плохо воспринимают анилиновые красители, потому окрашивают их по Романовского-Гимзы и Здродовского (последний метод – для обнаружения в зараженных тканях).

Патогенные риккетсии: возбудители риккетсиозов, с характерными лихорадочными состояниями и высыпаниями на коже (сыпнотифозные или пятнистые лихорадки). Rikkettsia prowazekii – эпидемический вшивый сыпной тиф.

Метод Здродовского (облегченная модификация Циля-Нильсена).
Фиксируют в пламени горелки мазок. Окрашивают карболовым фуксином Циля (без нагревания), промывают водой, обесцвечивают слабым раствором кислоты, промывают водой, докрашивают метиленовым синим.
Результат окраски: риккетсии – рубиново-красные, если внутри клетки – на голубом фоне цитоплазмы; ядро клетки-хозяина – синего цвета.